(0.5min时) 吸光度A4
(3.5min时) △At
(3min变化值) 抑制率Y
(%)
0.1 0.198 0.329 0.131 56.77
0.2 0.258 0.354 0.096 68.32
0.3 0.312 0.385 0.073 80.91
0.4 0.368 0.425 0.057 81.19
0.5 0.412 0.461 0.049 83.83
图3.3.2 浓度与抑制率的关系图
酶抑制率的计算公式:
式中:△Ao—— 对照溶液反应3min吸光度的变化值;
△At—— 样品溶液反应3min吸光度的变化值;
Ko —— 对照溶液吸光度值随时间的变化曲线的斜率;
Kt —— 样品溶液吸光度值随时间的变化曲线的斜率;
根据3.2空白样品吸光度△Ao的测定可知,△Ao=0.303,又根据抑制率的公式,可以计算出5种不同浓度下的抑制率。
例如:当C=0.1mg/L时,
=[ (0.303-0.131) / 0.303]×100%
=0.172 / 0.303×100%
=56.77%
从图3.3.2可知,随着敌敌畏浓度的增加,抑制率也在相应的增加,说明有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用,其抑制率与农药的浓度成正相关。
3.3.3 稀释倍数放大后的吸光度对比
由上面的3.3.2可知,当C=0.1mg/L时,抑制率最小为56.77%,还是很大,为了更加深入地研究酶抑制分光光度法的检测范围,我就又配制了5种浓度更小的敌敌畏溶液,比较他们的吸光度值,从而通过计算得到酶抑制分光光度法的检测下限。本次实验所配敌敌畏浓度分别为0.08mg/L、0.06mg/L、0.04mg/L、0.02mg/L、0.01mg/L,测得数据如表3.3.3所示。
表3.3.3 稀释倍数放大后的吸光度对比
浓度C
(mg/L) 吸光度A1
(0.5min时) 吸光度A2
(1.5min时) 吸光度A3
(2.5min时) 吸光度A4
(3.5min时)
0.08 0.195 0.298 0.342 0.363
0.06 0.154 0.276 0.323 0.350
0.04 0.130 0.254 0.311 0.339
0.02 0.113 0.237 0.295 0.328
0.01 0.095 0.221 0.286 0.321
图3.3.3 稀释倍数放大后的吸光度与反应时间变化图
3.3.4 稀释倍数放大后的抑制率对比
根据3.3.3中的测定结果,可以得到不同浓度的敌敌畏溶液反应3min吸光度的变化值,
即△At =A4 -A1,计算数据如表3.3.4所示。
表3.3.4 稀释倍数放大后的抑制率对比
浓度C
(mg/L) 吸光度A1
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