摘要:为了提高羰基还原酶的转化能力，采用新型常压室温等离子体（ARTP）诱变目标菌株雅致放射毛霉 (Actinomucor elegans)H2，以期改善细胞的羰基还原酶活力与立体选择性，提高转化产物中单一手性产品的光学纯度。诱变条件:功率220 W；气流量10 L/min；7个时间梯度处理。结果表明：当诱变时间为160 s及200 s时，致死率接近95 %，此时为最佳诱变时间。利用12孔板高通量筛选进行初筛，用高效液相色谱法分析突变菌株转化底物毕业论文 关键词：常压室温等离子体，高通量筛选，羰基还原酶，生物转化，(4-氯苯基)(吡啶-2-基)甲酮94847

Abstract: Actinomucor elegans strain was used as the target strain in order to improve the transformation ability of carbonyl reductase。Atmospheric Room Temperature Plasma was used to mutate the active carbonyl reductase strain to make it possible to obtain a single chiral enzyme。 Mutation conditions : Power 220 W; Air flow 10 L/min; 7 time gradient processing。 The results show : When the mutagenesis time was 160 s and 200 s, the lethality rate was close to 95 %, which was the optimal time of mutation。 The strains were preliminary filtered by high throughput using a 12-well plate culture method。 The ability of the mutant strain transformation substrate  (4-chlorophenyl) (pyridin-2-yl) methanone (CPMK) was analyzed by high performance liquid chromatography to rescreen。 By adding (4-chlorophenyl) (pyridin-2-yl) methanone as a substrate, the results showed that the enzyme conversion capacity increased from 77 % to 89 %。

Keywords: Atmospheric Room Temperature Plasma, High throughput screening, Enzyme activity, Biotransformation, (4-chlorophenyl) (pyridin-2-yl) methanone

目录

前言 3

1材料 4

1。1仪器 4

1。2试剂 4

1。3培养基配方 4

2 方法 4

2。1 菌种筛选 4

2。2菌种培养 5

2。3常压室温等离子体诱变及致死率 5

2。4 诱变菌株筛选 6

2。4。 1 初筛 6

2。4。2 复筛 6

3。结果与分析 7

3。1菌种获得 7

3。2诱变致死率 7

3。3初筛 8

3。4复筛 9

结论 11

参考文献 12

致谢 14

前言

(S)-(4-氯苯基)(吡啶-2-基)甲醇((S)-CPMA)，可用于合成新一代抗组胺倍他司汀类药物。倍他司汀类药物是一类具有高效低毒副作用特性的第二代抗组胺药物，对于过敏性疾病具有显著作用。然而(S)-CPMA的合成需要由(4-氯苯基)(吡啶-2-基)甲酮（CPMK）经羰基还原酶进行不对称还原从而获得，无法从自然界中得到[1]，且化学法合成具有成本高，环境污染大，立体选择性低等众多问题。论文网

羰基还原酶的种类繁多，实验中需要具有高立体选择性和催化活性的羰基还原酶来做生物催化剂。传统的方案是从富含微生物的土壤或其它环境样品中进行筛选并分离获得，然后针对不同的芳基酮底物，用不同底物进行转化测定转化率及ee值来判断酶活性[2]。虽然这种从自然界中筛选菌株的方法费时费力，但是在寻找和催化一些值得研究的大分子底物的羰基催化酶时有着不可替代的作用[3]。