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    1.2.4 反相高效液相色谱法
    刘魁[2]等在2007年用反相高效液相色谱法测定了绿色环保新剂型农药阿文菌素泡腾片中的阿文菌素浓度。实验中使用了C18液相色谱柱,以甲醇-乙腈-水(体积比42∶42∶16)为流动相,UV检测波长为245 nm。
    该方法适用于测定阿文菌素泡腾片的含量,即直接测定农药商品中所含阿文菌素的含量。具有操作简便、快速、分离效果好、峰型好、线性范围宽、精密度和准确度高、专属性好等特点,是进行产品质量控制较理想的分析方法。该方法的标准偏差为0.57,变异系数为0.57%,回收率在99.6%~100.1%之间。
    1.2.5 高效液相色谱-荧光检测法(HPLC-FLD)
    荧光检测法使检测的选择性和灵敏度显著提高,检测限较紫外检测法约低1个数量级,可满足阿文菌素类药物残留分析需要,但该方法对样品净化和操作要求严格,同时具有操作简单、灵敏度高、结果可靠等优点。实验中所用到的常用净化方法有多种,如固相柱萃取法(SPE),氨基柱净化法,C8柱净化法等等。
    该方法结合了柱前衍生-高效液相色谱法和液相色谱荧光法两种测定方法,适用于稻谷、秸秆等常见农作物中阿文菌素残留量的测定。该方法灵敏性较高,经张娟[2]等实施该方法后,发现在稻谷中的最小检测浓度为1. 000 μg /kg, 在秸秆中的最小检测浓度为0. 500μg /kg。
    1.2.6 高效液相色谱-紫外检测法(HPLC-UV)
    阿文菌素类药物具有共轭二烯结构,在λ=245 nm处呈现紫外吸收峰,用HPLC-UV检测可能比较方便,但在此波长区域,皮质激素、文生素、脂类、核酸等这些内源性物质也呈现紫外吸收特征,这些组织内源性物质净化困难,干扰了阿文菌素类药物的紫外光谱检测。实际上,应用高效液相色谱-紫外检测器检测的也只有血浆样品比较成功(检测限达0.002 mg,L),组织样品中药物的检测限都高于0.005mg/kg,且净化程序较为繁琐。
    该方法较适用于药品中阿文菌素含量的测定,适用于生产单位对阿文菌素B1( B1a+ B1b)及中间体的含量控制。采用该方法测阿文菌素预混剂中阿文菌素B1含量, 操作简便, 快速, 重现性好, 结果满意。
    1.2.7 一阶导数光谱法
    吴晓薇[2]等在2001年采用了一介导数光谱法,准确测定了农药样品中阿文菌素B1的含量。实验中使用了UV-2401 PC 紫外分光光度计及光谱工作站, 以1 nm 狭缝宽度, 2 nm间隔,在190~ 400 nm 波长范围内快速扫描采集阿文菌素B1 紫外吸收光谱, 拟合一阶导数光谱,从而获得标准品中阿文菌素B1的准确含量。
    采用HPLC(高效液相色谱)法来测定阿文菌素B1制剂的含量虽然准确度高, 结果可靠, 但设备依赖性强, 普及困难。本方法尝试的一阶导数光谱法对多种剂型都有很好的适应性。是一种经济、快速、准确、可靠的定量测定方法。具有一定的推广价值。
    1.2.8 酶联免疫法(ELISA)
    免疫学分析方法,可使分析过程简化,适合复杂基质中痕量组分的分析,其基本原来是利用抗原抗体的特异性反应。
    运用酶联免疫法(ELISA),可建立定量检测动物源性产品中阿文菌素残留的方法。通过交叉反应试验表明,本方法还可用于测定动物源性产品中埃比菌素和依文菌素的残留量。
    经赵卫东[3]等进行实验后,发现该方法对于猪肉、牛肉、鸡肉、羊肉等肉制品中阿文菌素的最低检测限为1.0 μg/kg,鱼和虾中的最低检测限为4.0 μg/kg 。酶联免疫方法与传统色谱质谱类仪器分析方法相比,由于前处理比仪器分析方法简单,且后续的检测可实现大量样本的同步检测, 可缩短大量的检测时间,另外,该方法具有成本低,操作简便,敏度也能达到仪器分析方法。
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