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    本文中,通过研究氧化石墨烯对DNA双链和单链吸附能力的不同,研发了荧光法检测重金属Hg2+,单链DNA吸附到氧化石墨烯表面之后,因荧光共振能量的转移,荧光猝灭。然而,DNA与Hg2+特异性结合后,形成双链的DNA序列从氧化石墨烯的表面脱附,从而其荧光得以恢复。它可提供一种低成本,快速,灵敏和高选择性的方法,也证实了Hg2+在生物学和诊断学的未来前景。

    1 材料与方法

    1.1 实验仪器与试剂

    DNA序列由上海生工生物工程技术服务有限公司合成(上海,中国), DNA序列:5’-GTGTGTTGTGTCTGTTTGG-FAM-3’(P1)。所有试剂均仅为分析,水则为超纯水。

    1.2 实验方法

    1.2.1氧化石墨烯的合成

    氧化石墨烯(GO)是根据Hummer的方法由石墨粉提取。石墨粉(1.0 g,325 mesh)放入冷硫酸(23 mL,0 °C)。再加入KMnO4(3.0 g),在搅拌的过程中要将温度控制在20 °C以下,加入高锰酸钾的操作完成之后,撤去冰浴,悬浮液在35 °C下搅拌30分钟。然后,缓缓加入超纯水(46 mL)。温度上升至98 °C,悬浮液在此温度下静置15分钟。加入温超纯水,在H2O2(1 mL,30%)的作用下,将悬浮液进一步稀释至140 mL。黄色悬浮液离心分离,用HCl反复冲洗(1:10)。最后将所得产物在60 °C干燥三天,可获得氧化石墨烯。

    1.2.2 DNA 的荧光检测

    不同浓度 Hg2 + 与P1 (1 μmol/L,20 μL) 孵育一段时间之后,加入石墨烯氧化物 (1 mg/mL,6 μL)。再使用PBS 缓冲液 ( (10 mmol/L,pH 7.5,50 mmol/L氯化钠) )将混合物稀释到 1000 μL并反应 40 分钟。使用 5301PC 荧光分光光度计(日本岛津) 和红外敏感探测器测定射频对混合物进行测量。从波长为 520 nm的发射光谱得到荧光强度。激发波长在 480 nm 被设置。狭缝宽度分别为 10 nm 励磁和10 nm 的发光。

    2 结果与分析

    2.1 荧光法Hg2+检测的机理

    为基于氧化石墨烯平台检测Hg2+的荧光生物传感器的方案。P1具有单链结构,可以吸附在氧化石墨烯表面,使P1末尾3处的荧光分子接近氧化石墨烯而使得荧光猝灭。Hg2+的加入由于T-Hg2+-T的形成,从而形成双链结构,但这种结构更稳定的DNA不能很好的吸收在氧化石墨烯表面,DNA从氧化石墨烯表面脱附,荧光得以恢复。从而开发一种用于检测Hg2+元素的敏感的有选择性的方法。

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