二氧化氯是世界卫生组织(WHO)和世界粮农组织(FAO)向全世界推荐的A1级广谱、高效、安全的化学消毒剂,是目前国际上公认的性能优良、安全无公害的杀菌消毒剂和食品保鲜剂,能够有效杀死几乎所有微生物,无不良气残留,可以阻止蛋氨酸生成乙烯和破坏已生成的乙烯,对动植物机体不产生任何毒副作用[3]。1996年,我国食品添加剂使用卫生标准(GB2760-1996)将稳定性ClO2列入食品添加剂中作防腐剂,2004年美国FDA(美国食品药品监督管理局)将ClO2批准为果蔬杀菌剂[4]。二氧化氯应用于食品保鲜的研究在世界范围内已经成为热门课题,其中在苹果[5]、葡萄[6]、芒果[7]、杏[8]等水果的保鲜中得到了很好的利用。Ca2+在植物成熟衰老生理生化调控方面具有重要作用,CaCl2是一种安全实用的保鲜剂,已被广泛应用在果实采后贮藏过程中,有研究表明0.8% CaCl2能有效延缓枇杷果实采后衰老[9]。
目前在国内外未见二氧化氯对枇杷保鲜效应的研究报道。本试验以冠玉枇杷为材料,研究不同浓度二氧化氯结合氯化钙处理在非冷害低温结合PE袋封装贮藏条件下,对冠玉枇杷采后贮藏期间SOD、POD、CAT、MDA、PPO等抗氧化酶系统指标变化的影响,旨在寻找ClO2对冠玉枇杷处理的最佳浓度,为有效解决冠玉枇杷采后损失和品质下降问题提供理论依据和实践参考。
1 材料与方法
1.1 试验材料
试验用的冠玉枇杷采自苏州市洞庭东山镇农户果园,2013年6月1日采摘后立即运回实验室,置于15℃条件下过夜预冷12 h,翌日剔除残次果,并选择色泽、大小以及成熟度基本一致的枇杷果实供试。
1.2 试验设计与处理
试验设计:3个水平(50、100、150mg/L) ClO2 +0.8% CaCl2处理,2个对照( CK1为清水,CK2为0.8% CaCl2),共5个处理。
处理方法:将挑选后的果实随机分成5组,其中一组作为CK1,用清水浸泡10min,自然晾干;一组作为CK2,用0.8% CaCl2浸泡10min,自然晾干;将余下3组果实分别用50、100、150mg/L ClO2 + 0.8% CaCl2浸泡处理10min,自然晾干。将每组果实分成27等份(每处理9次检测×3个重复),分别用0.02mm厚PE(聚乙烯)薄膜袋封装(每袋30个果实左右),作好标签。将所有果袋置于(7.5±0.5)℃人工气候箱中贮藏,期间每隔5d从各处理组随机抽取3袋(3个重复)样品检测下述指标。
1.3 检测指标与方法
1.3.1 超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定
采用NBT光还原法[10],以50%抑制的酶液量(μL)为1个酶活单位。取0.5g果肉,于0.05mol/L磷酸缓冲液(pH=7.0) 5mL中,冰浴研磨,4℃冰冻离心机10000r/min离心20min,取上清液测定酶活性。取3支试管,1支为对照管,另2支为测定管。在测定管中加入0.1ml粗酶液、3.1ml 0.05mol/L磷酸缓冲液(PH=7.8)、0.2ml 1mol/ml EDTA-Na2、0.2ml 20mg/ml L-甲硫氨酸、0.2ml 0.1mg/ml 核黄素、0.2ml 1mg/ml NBT,置于4000lx光照培养箱中反应15min。对照管以磷酸缓冲液代替酶液,混匀后,将对照管置于黑暗中。在722S分光光度计上测定560nm处吸光度值。
1.3.2 过氧化物活性酶(POD)活性的测定 源'自:优尔`!论~文'网www.youerw.com
POD活性的测定采用愈创木酚法[11]。取0.5g果肉,于0.05mol/L磷酸缓冲液(pH=7.0)5mL中,冰浴研磨,4℃冰冻离心机10000r/min离心20min,取上清液测定酶活性。在100μL粗酶液中加入4mL 0.3% 愈创木酚(用0.02mol/L、pH=6.0的磷酸缓冲液配成),然后加入50μL 0.3% H2O2 (用0.2mol/L、pH =6.4的磷酸缓冲液配成),混匀, 在722S分光光度计上每隔30s记录1次数据变化值(在470nm处的吸光度值),连续计5min,重复测定2次。
1.3.3 过氧化氢活性酶(CAT)活性的测定