以温度敏感水凝胶为固定化酶载体能使反应物与底物同时分离,将某些产物对酶的抑制解除;同时,还可以控制固定化酶的使用等。这是由于温度敏感水凝胶具有一个LCTS[5](低临界溶解温度),当溶液温度在此温度左右变化时,凝胶对酶的活性有一个“开/关”效应,当温度在LCTS以下时,凝胶溶胀,底物进入凝胶内部与酶发生反应,此时为“开”;当温度在LCTS以上时,凝胶发生退溶胀,阻止底物进入凝胶内部与酶发生反应,此时为“关”。因此,当一种酶被固定在热敏性聚合物上时,由于环境的变化产生的聚合物构象的急剧变化,能显著影响酶的活性和接近酶分子的底物。凝胶膨胀会影响进入凝胶基质的底物和从凝胶基质中出来的产物的扩散速率。这反过来会控制固定的生物催化剂整体的动力学特性。

本文关注的重点是使用一种新的方法将脂肪酶固定在热敏性载体上,我们在前期工作中已描述过这种方法。这种方法是基于收缩和膨胀聚合物,随后在载体内部将酶和戊二醛相交联,因此形成一种相互贯穿的网络系统。戊二醛是一种优良的交联剂[16-20],已被广泛应用于固定化酶和细胞领域。在中性pH环境中,它能与氨基基团快速反应。蛋白质的交联,无论是到载体中,还是在蛋白质分子之间,由于胺基的极性的作用,通常是赖氨酸残基的ε-氨基酸基团位于蛋白质表面。赖氨酸残基一般不参与催化,这就允许适度的交联以保持蛋白质的构象,从而保持其生物活性。聚合物载体用乙二胺胺化可以再聚合物表面得到α-氨基,这样可以提高酶与载体的结合强度。

本文将脂肪酶固定在PHEMA先用乙二胺胺化改性,再与NIPAM相交联制得的热敏性载体上和固定在先将PHEMA与NIPAM相交联之后,再用乙二胺胺化的热敏性载体上[22]进行了比较。

1.5 固定化脂肪酶的应用:

脂肪酶能够在油-水界面进行催化水解或醇解、酯合成、酯交换、多肽合成等反应,在制药、试剂、食品加工、生物能源等方面有着很大的应用前景[20]:

A.催化水解反应

油脂的水解是指将作为基质的油脂制成不均匀的态,使油脂与水接触良好,并采用催化剂,从而得到具有两相间亲合性的化合物。脂肪酶一般被认为能够吸附在水-油两相的界面上,而且能够在此界面上相互作用。

B.催化醇解反应

油脂的醇解反应即油脂的甘油分解反应。脂肪酶主要是通过利用三甘酯来制备单甘酯和双甘酯来催化甘油分解反应,并且通过加入特定的脂肪酶和控制反应条件可以获得不同量的单甘酯和双甘酯。

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