本文所研究的目标产物中糖的配基是对硝基苯酚,这种底物在一定条件下具有显色效果,利用分光光度计检测其对一定波长下光的吸收值即可计算出对应条件下酶的活性,因此它可以用来检测一些生物物质对酶活性的抑制能力,为糖化学工作者们研究新型糖苷酶抑制剂提供帮助。例如王文武等人通过水提法提取海藻中的多糖,检测其对α淀粉酶的抑制作用,这其中就通过分光光度计测定反应体系吸光度计算得出海藻中的多糖对α淀粉酶的抑制率,反应体系表如下[6]:
表2。2 测定反应体系
实验号 缓冲液(ul) 酶量(ul) 多糖(ul) 底物(ul) 吸光度
1 2600 0 0 400 A1
2 2580 20 0 400 A2
3 1695 0 50 400 A3
4 1675 20 50 400 A4
在上表中通过计录不同时间下吸光度的数值,套入抑制率计算公式即可得出结果。这类研究可以帮助我们筛选更加有效的糖苷酶抑制剂,提升治愈糖尿病的效果,在医疗诊断上功不可没。
在生物领域,利用这种糖苷酶的检测方法可以筛选高效生产酶的菌株。例如姚卫荣等以对硝基苯基-β-D-葡萄糖苷为底物检测在不同PH、温度、底物浓度下对纤维素体系下硝基苯基-β-D-葡萄糖苷的酶活性,以此方法来筛选菌种,并成功选育出高产菌株[7]。来*自-优=尔,论:文+网www.youerw.com
除了对硝基苯酚以外,2--氯-4硝基-苯酚也能够在特定条件下发色,该种芳苷试剂在临床诊断中也已经被广泛应用,原理和对硝基苯酚一样,在特定波长下显色,通过比较该波长下吸光度上升的快慢即可推断酶的水解能力。例如王蓉等首先确定底物浓度、最适温度、PH值以及不同离子对β-D-半乳糖苷酶的水解能力的影响,然后以β-D-半乳糖苷为底物研究不同人群体内β-D-半乳糖苷酶的水解能力,统计相应的GAL值,作为肾小管病变的重要指标[8]。李兴民等合成2-氯-4-硝基苯-α-L-岩藻糖苷,以此为底物探索了PH、血清对α-L-岩藻糖苷酶水解底物速率的影响,这种糖苷试剂可以用于肝癌的早期检测[9]。以上这些研究均展现出糖苷试剂对临床医学上疾病检测的巨大贡献。
由于糖配基的复杂性以及构型的不同,至今人们已经发现的糖苷酶成千上万,但并不是每一种酶都找到了相应的作用底物,而且随着糖苷酶在临床诊断中发挥的作用日益变大,对糖苷试剂和新的糖苷酶底物需求也将越来越大,研究出一种经济实用而又绿色化合成糖苷酶底物的方法势在必行。