具有光学选择性。

表 1 HNL 按结构差异分类

Table 1 classification according to structural difference

分类 结构 天然底物 主要来源

FAD 依赖型 HNL

高度糖基化的单链蛋白

（属于氧化还原酶类）

（R）（+）扁桃腈 蔷薇科、李亚科、苹果亚科

α/β水解酶

复杂的多肽结构，含有α/β 结构（属于α/β水解酶）

多种（R）和（S）氰醇 高粱属、木薯、亚麻

由于植物中提取的醇腈酶难以大量应用于工业生产，因此利用微生物很容易在短时间内 转化和培养并进行大规模生产这一特点，许多植物的醇腈酶已经在微生物体内克隆并实现过 量表达。如橡胶醇腈酶 HbHNL 的有效基因已经在酿酒酵母、大肠杆菌和甲醇酵母等中实 现了过量表达。王丹[12]等人也将木薯醇腈酶 MeHNLs 在大肠杆菌中进行过量表达，所测最 高酶活力为 4540U·L-1 发酵液。大肠杆菌表达系统具有遗传背景清楚，培养条件简单，周 期短，质粒稳定性好等优点，广泛用于外源基因的表达，因此本实验选择大肠杆菌作为宿主， 实现 HNL 的过量表达。本研究基于确定的目标醇腈酶基因，采用 PCR 策略或全基因合成 技术得到目标基因片段，选择合适的表达系统，构建表达质粒进行重组表达，实现拟南芥 (Arabidopsis thaliana)醇腈酶基因在大肠杆菌中的表达。通过优化产酶条件，提高目标蛋 白的胞内表达水平及活力，实现目的基因在外源宿主的过量表达，为保证醇腈酶的纯化和酶 学性质研究研究奠定基础。

2 实验材料与方法

2。1 实验材料

2。1。1 菌种和质粒

E。coli DH5a，E。coli BL21（DE3），pET-28a(+)本实验室保藏。基因重组大肠杆 菌 E。coli pET-HNL-At 由本实验室构建，含有重组质粒 pET-28a(+)-HNL-At，用于来源 于拟南芥(Arabidopsis thaliana)羟基腈裂解酶的表达。文献综述

2。1。2 主要实验仪器

表 2 主要实验仪器

Table 2 Primary experimental instrument used in this study

仪器名称 型号 生产商

超净工作台 AV-100 西班牙 Telstar 公司

恒温空气摇床 HZ—9211KB 太仓华利达实验设备公司

恒温摇床 TS-200B 精达仪器制造公司

NucleicAcid /Protein Analyzer DU730 美国 Beckman 公司

移液枪 Eppendorf 德国 Eppendorf 公司

试管震荡器 WH-861 华利达实验设备有限公司

脱色摇床 ZD-9556 金坛市杰瑞尔电器有限公司

立式压力蒸汽灭菌器 BXM-30R 上海博讯实业有限公司医疗设备厂

超声细胞破碎仪 S-4000-010 美国 Misonix 公司

电子天平 JA12002