生物转化2-苯乙醇辅因子NADH/NAD+的检测研究(10)
图4-2 提取液的配比（甲醇：乙醚）对辅酶提取得率的影响
Fig.4-2 Effect of extracts （Methanol：Ether）on the yield of total cofactor
由图4-2可知通过对甲醇乙醚的配比含量的不同根据实验结果得甲醇与乙醚的提取液配比1:1时具有较高的提取效率，可能与甲醇和乙醚关于细胞的渗透压有关系。如图4-2所示，随着化学渗透剂甲醇用量的减少辅酶的释出率明显增加可能的原因是乙醚对增加细胞膜的通透性有较好的效果，但大量的甲醇可能影响了乙醚与菌体的接触面积导致辅酶不能被彻底的释放到胞外；但是如增加乙醚的量，辅酶的释出率明显减少，可能的原因是当乙醚的量远远超过甲醇的量时在离心的过程中两者会分层，互不相容导致辅酶含量分布不均匀，进入液相检测时抽取液体中辅酶含量不匀导致含量降低。所以实验选取甲醇：乙醚=1:1的提取液用于有机溶剂破胞法。4.1.3 超声功率
超声功率的强弱与产热的大小密切相关，超声的公率越大，产生的热量就越多；反之超声的功率小产的热量相对较少。所以对超声功率的大小做单因素实验是相当有必要的，通过单因素实验确定对酵母内辅因子影响最小的功率。对超声功率的大小进行实验的结果如下图4-3所示：
图4-3 超声功率对辅酶提取得率的影响
Fig.4-3 Effect of ultrasonic power on the yield of total cofactor
由图4-3可知，随着超声波提取时间的增加，酵母细胞内辅因子NAD+、NADH提取得率先稳步上升而后有所下降，在提取300w其含量最高。在一定范围内，超声功率越大则其得率就越高；但若超声功率过大辅酶的含量会明显的减少，可能的原因是超声功率过大则会产生大量的热，既是全过程都在冰欲中进行但是过大的超生功率瞬间产生巨大的热量，不可能及时的散发热量，那么酵母细胞内辅因子NAD+、NADH就会失活，其被检测的含量随之下降；若超声功率过低则酵母不能完全破碎，细胞内辅因子NAD+、NADH也不能完全释放，那么所检测到的辅因子的含量也会降低。所以本试验选择超声波提取功率为300w。使酵母细胞内辅因子NAD+、NADH得以充分释放。
4.2 PB设计结果分析
PB 试验设计主要用于筛选显著性影响因素。本试验将Plackett-Burman 设计与响应面分析法相结合，可以快速、有效地从影响酵母细胞内辅因子NAD+、NADH提取得率的因素中筛选出关键因素， 并可实现工艺优化。
表4-1 回归方程方差分析
Table 4-1 Analysis of variance of regression equation
来源 Squares df Square Value Prob>F
Model 323.89 3 107.96 11.41 0.0029 显著
B-加入提取液 84.2 1 84.2 8.9 0.0175
D-震荡次数 58.02 1 58.02 6.13 0.0383
E-超声时间 181.68 1 181.68 19.2 0.0023
Residual 75.69 8 9.46
Cor Total 399.58 11