Forward primer（10μM）                             1

Reverse primer（10μM）                             1

DNA                                          2

ddH2O                                        6

PCR扩增反应的程序为：94℃5min；94℃30sec，55℃30sec，72℃1min，35个循环；72℃10min；4℃保温；

   1。2。3。2  琼脂糖凝胶电泳

1）制作琼脂糖凝胶，浓度为5。0%。取14克琼脂粉溶于280mlTAE中，微波加热至无小气泡产生即可置于平板中冷凝，约半小时；

2）取PCR扩增后产物约10μL，点样于事先制作已经冷凝的琼脂糖凝胶中；

3）在TAE电泳缓冲液中进行电泳，设置电压为220V，时间大约为1小时；

4）最后通过紫外凝胶成像系统，扫描凝胶，获得图像，进一步分析样品与双亲标记的多态性。

1。2。4 水稻叶片总RNA的提取

本研究提取水稻叶片总RNA采用Trizol法,实验的操作步骤如下：

1) 取水稻的叶片（倒一叶）组织,用液氮速冻；文献综述

2) 事先将研钵用液氮预冷,再大约取0。1g样品置于研钵中，一边加液氮液氮一边将材料研磨成粉末,再将粉末分装成两份快速加入1。5mL离心管中，再于每管加入1mL Trizol,混匀后置于冰上；

3) 接着加入200μL的氯仿,大力快速振荡混匀,于冰上静置5min,静置后用可温度调节的离心机调至4℃12000rpm离心10min；

4) 离心后，吸上清至新的RNA专用的1。5mL离心管中,再加入2/3上清体积的异丙醇,上下颠倒混匀,再于4℃12000rpm离心10min；

5) 第二次离心后，弃上清,加入1mL 75%乙醇（DEPC水现配）,并用枪头吹打沉淀以便洗涤,再于4℃12000rpm离心10min后,弃上清,再在杀菌后的通风橱中风干后加入30~50μL RNase-free水溶解RNA,于-80℃保存备用。