1。2。1。2白芨蒴果的采集与处理

采集有120-180天的白芨蒴果,切除花梗和残留的柱头、花瓣,用70%酒精擦拭其表面干净后浸入1 g·L-1 HgCl2溶液中20分钟,在超净工作台上以无菌水清洗2-3次,吸干水分后纵剖开白芨蒴果,将种子直接撒播于已经配好的灭过菌的种子萌发培养基上,播种密度以大致白芨种子铺满培养基,白芨种子之间不宜相互重叠、覆盖,播种20瓶封口并做好标记,然后放置到24小时全天人工模拟环境培养室内发育、生长。

1。2。1。3 观察白芨种子的萌发与记录论文网

自播种那天起,每间隔一个星期去人工培养室内观察白芨的生长发育情况,主要是记录它在前期播种时有没有染菌、萌发率、形态变化等并做好实验记录。

 白芨种子在播种15天后,可以在有些瓶内清楚地观察到有少数的胚慢慢膨大并突破种皮,此时白芨种子开始萌发,光照条件下白芨种子开始由灰白变绿。但是白芨种子萌发参差不齐,播种40天后仍有白芨种子才开始萌发。最后经抽样统计,在20瓶白芨种子萌发培养基中,播种45天后,平均萌发率达86。5%。并且萌发较早的白芨种子会在它的顶端产生一个小突起,随后逐渐形成一枚子叶,继续培养则它的顶端会慢慢伸长并长出1~2枚叶片。

1。2。1。4 白芨苗的继代培养(转到继代培养基)

 白芨种子自播种60天后,白芨苗在种子萌发培养基里生长比较旺盛,已大致长满培养基且在顶端分化出叶片,但此时种子培养基内的营养元素基本消耗殆尽,可转到白芨幼苗幼芽的增殖培养基内,让其进入下一个阶段的茁壮生长。

1。2。1。5配制白芨幼苗幼芽增殖培养基

2。37g MS、250uL TDZ(6-BA)、2。5g 活性炭、15g 蔗糖、4g 琼脂、500mL 水,按上述配方,精确称量,定容到500ml的搪瓷杯内,煮沸溶解,pH值调至5。8-6。0,然后平均倒入15个玻璃瓶中,不透气膜封口,用高压灭菌锅灭菌2h,此培养基用于白芨幼苗幼芽培养。 

1。2。1。6无菌室内操作白芨苗的继代培养

在白芨幼苗的继代培养操作之前,首先打开超净工作台上的电源,依次关闭玻璃挡板,打开通风电源按钮、紫外灯灭菌按钮、室内紫外灯,然后离开房间,杀菌20分钟-30分钟,能够有效地杀死细菌和微生物,防止白芨幼苗在继代培养操作时受到污染和染菌。灭菌结束后,在外面穿上鞋套进入无菌室内,然后把事先灭菌好的白芨幼苗幼芽增殖培养基、生长在白芨种子培养基里有两个月的白芨依次放入到超净工作台内,此时台面上还有酒精灯、70%的酒精、棉球、镊子、操作刀等。首先用70%酒精把双手、台面进行彻底擦拭、消毒。点燃酒精灯,依次在酒精灯旁按照无菌操作要求把白芨幼苗接到继代培养基内,每个继代培养基内转入白芨幼苗10-15株,此过程要求细心,动作要精确,防止在操作过程中染菌。操作完成后,封口并做好标签记录,把继代好的培养基放入人工培养室内培养,然后清理台面,做后续观察和实验。

1。2。1。7继代增殖文献综述

由于白芨种子之间存在遗传差异以及外部环境等一系列因素的影响,白芨植株的生长速度有着显著差异,继代培养15天后,可以在人工培养室内清楚地观察到大部分培养基里白芨苗生长迅速,多数植株高度超过2cm,有的甚至在它的基部形成大小不等的假鳞茎。等白芨幼苗在培养基内生长一个月后,此时培养基内的营养元素已基本消耗殆尽,我们要做一个观察记录,测量一下幼苗的平均株高,统计此次操作污染掉的瓶数,计算出污染率等。然后再次配制白芨苗的继代培养基,按照无菌室内的操作要求规范对白芨幼苗继续转接,并做好标签记录,把第二次继代好的培养基放入人工培养室内培养,做后续观察和实验。

上一篇:蝉花多糖对金黄色葡萄球菌抑菌机理的初步研究
下一篇:样品中乳酸菌的分离及抑菌活性研究

三叶青的内生真菌对其生...

小组合作学习提升生物科...

糖摄入与应激反应的相互作用

样品中乳酸菌的分离及抑菌活性研究

蝉花多糖对金黄色葡萄球...

四环素对反硝化工艺菌群影响的研究

嗜热光合细菌Chloroflexusa...

84例老年股骨颈骨折围手术...

年轻人學历低可以干什么...

霰弹枪国内外研究现状

H&M的营销策略研究+SWOT分析

投资创业怎么找项目,如...

PC构件生产线温控养护室任务书

月季营养生长对生殖生长影响

塔里木盆地地貌古新世地...

过渡金属掺杂NdFeO3的合成与磁性能研究

网络媒体视野下高校學生...