3。2 黄瓜CsSPL9和CsSPL13基因植物表达载体构建 13

3。2。1 表达载体酶切验证 13

3。2。2 农杆菌菌落PCR验证 14

3。3 转基因拟南芥的获取和验证 15

3。3。1 转基因拟南芥的获取 15

3。3。2 转基因植株的CsSPL9和CsSPL13基因表达验证 15

4 分析与总结 16

1 引言来自优W尔Y论W文C网WWw.YoueRw.com 加QQ7520,18766

植物的发育进程受多种因素的影响。随着分子生物手段的广泛运用，大量研究显示SPL基因(SQUAMOSA promoter-binding protein-like)对植物的发育进程有着不可忽视的作用。黄瓜作为一种世界性经济作物，已成为了植物分子生物学中被广泛研究的材料，许多针对长距离物质运输和植株性别分化的研究都在黄瓜中相继展开，但目前尚未有关于SPL相关基因的克隆和这些基因参与黄瓜生长发育调控和性别分化的相关报导。因此研究黄瓜SPL基因功能对于揭示黄瓜性别分化的分子机制和提高黄瓜雌花数量具有重要意义。

1。1 SPL基因的研究现状

一定的作用。

1。2 研究的引出

植物特有转录因子SPL调控了植物的发育，尤其是发育时相转变和开花进程。在前期实验中，我们以“津研4号”野生型黄瓜的雌雄花芽为材料，发现有两条黄瓜SPL同源基因在雌花芽中积累量较高，很可能参与了黄瓜性别分化调控，但其具体功能尚未有明确的报道。我们期望通过研究，了解黄瓜SPL基因与生长发育、成花诱导、花器官性别分化间的关系，因此本实验拟分析和克隆这两个SPL基因，构建植物表达载体并导入农杆菌，利用花絮浸润法遗传转化模式植物拟南芥，获取和验证转基因纯合拟南芥植株，进一步考察黄瓜CsSPL基因对拟南芥生长发育的影响，以期探索CsSPL基因的潜在功能，为进一步揭示其调控机制提供新的数据和参考。论文网

利用生物学信息手段，我们发现上述两条黄瓜SPL同源基因，黄瓜Csa002608基因编码蛋白序列与拟南芥AtSPL9蛋白同源性为41%，而黄瓜Csa005294基因编码蛋白序列与拟南芥AtSPL13蛋白同源性为40%，它们互相之间的亲缘关系相对最近。因此，我们将黄瓜Csa002608基因命名为CsSPL9，将黄瓜Csa005294基因命名为CsSPL13，并在后续实验中持续使用。

2 材料与方法

2。1 材料

实验所用野生型拟南芥（Arabidopsis thaliana）为Columbia-0生态型，于光照培养箱内进行培养，光周期均为长日照16 / 8 h，湿度70％，培养温度为21 ℃。野生型黄瓜品种为“津研4号”，培养温度为28 ℃。

大肠杆菌菌株为DH5α，农杆菌菌株为GV3101。

2。2 主要试剂和仪器

主要试剂：Trizol、限制性内切酶、T4连接酶、克隆试剂盒、大肠杆菌感受态细胞购于Takara宝生物工程（大连）有限公司；PremixTaq试剂盒、DNA Marker、逆转录酶和割胶回收试剂盒购于北京康为世纪生物科技有限公司；抗生素、琼脂糖、MS培养基购于上海生工生物工程有限公司。引物订购和DNA序列测定均由上海生工生物工程有限公司完成。定量PCR试剂SYBR Green Premix ExTaq购自Takara公司。B5基础盐培养基、表面活性剂silwet-L77购于美国Sigma-Aldrich公司。筛选用潮霉素（Hygromycin）购于德国Merck公司。

主要仪器：光照培养箱、超净工作台、PCR扩增仪、电泳仪、离心机、高速台式冷冻离心机、恒温水浴锅、摇床等仪器。