3)用分光光度计,在波长645 nm、663 nm处分别测定上述提取液的吸光值,以混合液为空白对照。
4)计算:
叶绿素含量(单位:mg/g。FW)
Ca=12。7D663-2。59D645 Cb=22。9D645-4。67D663
含量(单位:mg/g。FW)=(C*V)/(1000*W)=C*0。4
1。3。2。 酶活力
对经过逆境处理后的水稻中SOD、POD、GSH-PX、CAT酶的活力测量,采用以下方法:
首先提取粗酶液:0。3 g鲜样+8 ml 0。05 M pH7。8的PBS提取液,研磨匀浆,1000 r/min离心5 min,上清液即为酶粗体液。
(一) SOD测量方法
1)NBT反应液:1 L PBS(同提取液)+1。93 g甲硫氨酸(待完全溶解后再溶解其他物质)+0。0458 g NBT+0。0291 g EDTA+0。00046 g核黄素(测定前再加入)
2) 3 ml NBT反应液于小烧杯中+100 μl酶粗提液,于4000 Lux下光照15 min,以3 ml NBT反应液+100 μl提取缓冲液为CK。OD 560测定。
3)计算:SOD活性(u/g)=[(OD对照-OD测试)/ OD对照]×(100/50)×稀释倍数/鲜重
(二) POD测量方法
100 μl 酶粗提液+2700 μl PBS(25 mM,pH 7。0,+2 mM EDTA)+100 μl愈创木酚(1。5%,1。5 ml定容于100ml)+100 μl H202(300 mM,1。53 ml 30%的H202定容于50 ml);摇匀,迅速转入比色皿,A 470动力学方法测定,取15-25 s曲线斜率作为其活性。
(三)CAT测量方法
100 μl酶粗提液+2800 μl PBS(25 mM,pH7。0,+2 mM EDTA)+100 μl H2O2(300 mM,1。3 ml 30%的H2O2定容于50 ml);摇匀,迅速转入比色皿,A240动力学方法测定,取15-25 s曲线斜率作为其活性。
1。4。 数据处理文献综述
利用SPSS软件,EXCAL软件将所得数据进行处理,将所得结果表格化以及图形化。
2。 结果和分析
2。1。 叶片叶绿素含量变化
图1A显示, 在150 mM NaCl处理下,OV 14-4和OV 17-2株系的叶绿素含量随时间进程均高于日本晴,其中OV 14-4株系在盐处理24 h、48 h后叶绿素含量为292。11 mg/m2和314。89 mg/m2,分别比同期的日本晴叶绿素含量高18。42%,和18。03%,统计分析呈差异极显著(P<0。01)。恢复正常营养液培养48 h后,日本晴叶绿素含量略有回升,但是两个过表达株系的叶绿素含量仍分别高出日本晴叶绿素含量的8。13%和8。62%,统计学分析呈差异显著(P<0。05),说明转OsSTSL2基因的过表达株系经过盐胁迫后可保持较高的叶片叶绿素含量。两个RNAi株系在盐处理条件下,叶片叶绿素含量变化不显著,与日本晴相比,叶片叶绿素含量均处于较低水平,在恢复正常营养液培育48 h后,仍未见叶片叶绿素含量的显著回升。