摘    要利用基因编辑技术探究基因的功能和某些基因在特定疾病的病理发病学中的影响，在近年来生命科学研究领域有极大的突破。尤其是第三代的CRISPR/Cas9基因编辑技术自兴起以来，其以便捷、高效和相对廉价的优点成为生命科学实验室在分子水平上的重要研究工具。本课题应用该项技术，以斑马鱼作为模式动物，根据靶位点序列设计特殊gRNA 实施定点的突变，进行基因测序鉴定并检测突变效率。结果成功敲除斑马鱼Zmiz1a基因，确定我校斑马鱼实验室拥有独立操作该基因编辑技术的能力，为进一步的基因功能性研究奠定了基础。85274
毕业论文关键词：CRISPR/Cas9基因编辑技术； 模式动物； 斑马鱼； 基因

Abstract Using gene knockout techniques to study the function of genes and the role of certain genes in the etiology and pathogenesis of specific diseases has made significant progress in the field of life sciences in recent years。 Especially the third generation of editing technology （CRISPR / Cas9 gene editing technology）。 Since its convenient, efficient and relatively inexpensive advantages，it has become a kind of important research tool at the molecular level in the life science laboratories。 In this study, the zebrafish was used as the model animal and the specific gRNA was designed according to the target sequence to conduct the mutations。 The mutations were identified by genetic sequencing and the mutation efficiency should be tested。 The results of knockout Zmiz1a gene of zebrafish, representing our zebrafish laboratory has an ability to operate the gene editing technology independently, laying the foundation of further genetic functional research。 

Key words: CRISPR / Cas9 gene editing technology； model animal ； zebrafish； gene

目 录

摘要 Ⅱ

1 引言 1

1。1 基因编辑技术的发展与应用 1

1。2 CRISPR／Cas9技术的优势 1

1。3 基因编辑技术在模式动物源Q于W优H尔J论K文M网WwW.youeRw.com 原文+QQ75201.,8766 上的应用 2

1。3。1 小鼠 2

1。3。2 斑马鱼 2

1。4 本研究的目的及意义 2

2 实验内容及流程 3

2。1 实验内容 3

2。2 试剂的配方和合成体系 3

2。3 实验仪器设备 3

2。4 实验流程图 4

3 实验的步骤和方法 4

3。1 斑马鱼的饲养 4

3。2 建立并检测CRISPR基因编辑技术的系统 4

3。3 独立设计斑马鱼基因Zmiz1a的靶位点 4

3。4 设计gRNA引物、PCR鉴定引物 5

3。5 体外合成gRNA以及Cas9mRNA 5

3。6 收集鱼卵用于显微注射 7

3。7 显微注射干扰胚胎发育 7

3。8 酶切或测序检测基因敲除效率 7

4 实验结果与分析 8

4。1 杭州师范大学生命环境研究所CRISPR/Cas9技术系统的建立 8

4。2 利用CRISPR技术敲除斑马鱼Zmiz1a基因