多糖是由许多单糖聚合而成的天然高分子化合物，是生命有机体的重要组成部分，是许多中草药的主要活性物质成分。大多数真菌多糖具有抗肿瘤、抗病毒、抗衰老、抗菌等功效[5]。近年来随着抗生素的迅速发展和广泛应用，细菌及真菌耐药性增加，致使部分抗生素疗效降低及条件性致病菌增加，在临床上造成一定威胁[6]。多糖作为蝉花活性成分中最具代表性的抑菌活性物质理应受到关注。虽然有研究表明蝉花多糖对某些致病菌有抑制作用，但科研人员在此领域的研究多集中在体外抑菌效果讨论上[7]，蝉花多糖确切的抑菌机制尚不明确，这也给进一步研究和提高蝉花多糖的抑菌效果及实际应用带来了困扰。本课题则是针对蝉花多糖的抑菌活性进行初步性的研究。

2实验材料和方法

2。1。实验材料

2。1。1指示菌菌种：大肠杆菌、蜡样芽胞杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、化脓链球菌、粪肠球菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯氏菌、乙型副伤寒沙门氏菌、白色念珠菌、链格孢菌、扩展青霉和黑曲霉为指示菌。

2。1。2实验仪器设备：

超净工作台：苏州净化设备有限公司             

高压灭菌锅：致微(厦门)仪器有限公司         

恒温培养箱：上海精宏实验设备有限公司

恒温振荡器:太仓市实验设备厂           

冰箱：青岛海尔电器有限公司

分光光度计：日本岛津有限公司

电子天平：奥豪斯仪器(上海)有限公司 

微波炉：广东格兰仕基团有限公司

超净工作台：苏州净化设备有限公司

移液器：德国eppendorf公司

电热恒温水浴锅：常州国华有限公司 

2。1。3培养基的配置

①LB 液体（固体）培养基

胰蛋白胨 5。0 g

酵母提取物 10 g

氯化钠 10 g

（琼脂粉10 g）

加入自来水，定容至1。0 L。121 ℃，0。10 MPa灭菌20 min，4 ℃保存。

②沙氏培养基

蛋白胨10 g

葡萄糖40 g

琼脂20 g论文网

加入自来水，定容至1 L。115 ℃灭菌20 min，4 ℃保存。

③PDA液体（固体）培养基

马铃薯 200 g

葡萄糖 20 g

（琼脂粉10 g）

将马铃薯去皮，切碎，加水煮沸20 min后，用双层纱布过滤取上清液，加入20 g葡萄糖溶解，加入自来水，定容至1。0 L。121 ℃，0。1 MPa灭菌20 min，4 ℃保存。

2。2实验方法

2。2。1蝉花多糖的提取

   提取：将烘干至恒重的蝉花粉碎至200目，精密称取蝉花1。0g于50ml离心管中，并加入10ml水，于微波炉中高火加热提取1。5min，取上清备用。

   醇沉：上清加3倍体积的95 %乙醇，封口，4℃冰箱放置12h，5000 rpm离心15min，弃上清，待沉淀晾干后入加9ml水得粗多糖溶液。 

   脱色：粗多糖溶液加1毫升30 %的过氧化氢混匀（过氧化氢终浓度3。0 %），60℃保温脱色2h，打开盖子继续加热15min去除过氧化氢。

   去蛋白：在溶液中加入2。4倍的Sevage（氯仿：正丁醇 5：1）震荡，萃取25min ；离心，取上层清液，加入3倍体积的95 %乙醇，4℃静置4 h，离心，弃上清，沉淀晾干即为精多糖。

2。2。2蝉花多糖的含量测定

   分别取质量浓度为 100 ng/μL的葡萄糖标准液0, 0。1, 0。2, 0。3, 0。4, 0。6, 0。8, 1。0毫升于试管中，并用蒸馏水补齐至2。0ml，使各管葡萄糖含量分别为0, 10, 20, 30, 40, 60, 80, 100 μg，各管加0。05ml 80 %苯酚溶液和5。0ml浓硫酸，静置10 min，30 ℃水浴15min，测量各管490 nm处吸光值，以葡萄糖浓度C（mg/mL）为横坐标，吸光值A为纵坐标，绘制标准曲线。取2。0ml待测溶液按上述方法测定OD值，计算样品中蝉花多糖的含量。实验重复3次。