1。材料与方法

1。1材料

   本实验材料购买于湖北荆州市监利县，置于实验室中进行培养，实验一周前开始不进食。

1。2方法

1。2。1水蛭解剖

将水蛭放在大的培养皿里，用清水浸没，然后用胶头滴管吸取无水酒精并缓慢滴加，滴加时不可直接滴在水蛭身体上，而应滴加在清水里并缓慢搅匀，直至水蛭身体不再蠕动。然后将其置于蜡盘上，找出它腹部的雄性生殖孔和雌性生殖孔，沿两孔所在直线剪开，取其精巢、卵巢放在5ml离心管里，标号名称。用10%甲醛固定48小时，30%，50%，70%梯度酒精脱水，样品置于70%酒精-20℃保存备用。

    宽体金线蛭结构图：

1。2。2脱水

    柔软并含有多量水分的组织是不易切成薄片的，故必须增加组织的硬度。石蜡切片法就是石蜡渗入组织 ，以达到支持增硬的作用。但水与石蜡是不互相混合的，因此，在浸蜡，包埋前，必须脱水。常用的脱水剂是酒精。将样品放入低浓度的酒精开始，增加浓度，直至无水酒精。具体方法：样品经80%酒精     85%酒精         90%酒精      95%酒精（Ⅰ）     95%酒精（Ⅱ）     无水酒精（Ⅰ）      无水酒精（Ⅱ），各级酒精30min。脱水应彻底，注意在每阶段脱水后，把酒精淋干再放入另一阶段。

1。2。3透明

   二甲苯是一种常用的透明剂。将脱水后的材料经1:1无水酒精与二甲苯     1:2无水酒精与二甲苯      二甲苯（Ⅰ）     二甲苯（Ⅱ），各级时间为25min ,20min ，10min ，10min。务使组织达到透明为止。

1。2。4浸蜡文献综述

   先将装有56-58℃石蜡的三个蜡杯放在电热恒温鼓风干燥箱内融化，并使其温度不超过65℃。将透明过的材料放入二甲苯与石蜡1:1      二甲苯与石蜡1:2      石蜡（Ⅰ）      石蜡（Ⅱ）。各杯时间分别为20min ，20min, 1h,1h。

1。2。5包埋

   将浸蜡后的材料包埋于石蜡中，并使它凝固成蜡块，这一过程称为包埋。包埋前，首先用甘油均匀涂抹小酒盅内部四周，然后往小酒盅内倒入热石蜡，接着用镊子将浸蜡后的材料夹入小酒盅里，应切面朝下，位置放正，便于后期切片操作。整个过程需要在保温箱里操作，以防石蜡中途凝固。然后将小酒盅平缓移入室温使其自然冷却，一段时间后，将小酒盅放在冷水中，待石蜡凝固后，拆去小杯子即成蜡块。重复上述步骤，直至将所有材料都包埋好。随后，将蜡块一一放入标记好的袋子里。

1。2。6切片

   切片前，根据材料大小先将蜡块用刀片修整成上下两边平行的正方形或长方形。将修整后的蜡块粘在小木块上，小木块装在切片机上，以待切片。在旋转式切片机上将蜡块切成4-6um厚的薄片（本实验采用5um厚）。切下的薄片连成蜡带，用毛笔与解剖针轻轻取下蜡带，放在蜡带盒内备用。