3 硫化氢对植物的影响

很早关于硫化氢（H2S）分子的研究报道认为，植物能够释放这种气体分子，但研究者一直将其定性为有毒气体，主要研究它们的毒性机理。最近，越来越多的报道表明：低浓度的H2S在动物的信号调控网络中扮演着重要角色，调节多种生理、病理活动，而且关于H2S在植物体中的生理功能的研究报道尚开始起步。

目前已有报道认为H2S对植物幼苗的生长发展进程中的各种生理生化途径有不同程度的影响，如H2S对小麦、黄瓜等种子萌发中发挥信号分子的作用，对甘薯、黄豆等幼苗生长过程中的各种生理生化指标起调控作用，并能有效缓解某些毒害作用等。崔为体的研究表明，硫化氢在植物的生理功能包括参与植物气孔运动的调节，促进植物根的发育，增强植物的光合作用，延长花期以及延缓衰老，增加植物的抗逆性，降低离子毒害以及缓解氧化伤害[8]。不同浓度的硫化氢决定了其对植物的具体作用。

4 材料与方法

4。1 材料培养

选用淮稻5号种子，挑选去除发育不良的种子，留下大小相似、颗粒饱满的种子，清洗后放入水中浸泡30-60分钟，浸泡后将其均匀散布在固定于塑料盒的纱网上，往盒中加入适量的水，放入26℃左右的培养箱中催芽。每天定时加水换水，在发芽5-7天时，将已发芽约3厘米的幼苗中长势相似的株苗，用海绵包住幼苗，使幼苗不紧不松置于海绵中，并移入打孔约1。5厘米深的泡沫板孔中，置于装有2L霍格兰营养液的塑料盒中培养。盒子置于培养箱中，设定昼夜温度为28、26℃，湿度为70%-80%。每两天更换一次培养液。

4。2 实验设计论文网

幼苗转移生长1天后，对水稻幼苗进行处理，分别为Ck（对照），Cd25（25μmol/L Cd），Cd50（50μmol/L Cd），Cd25+（25μmol/L Cd+0。2mmol/L NaHS），Cd50+(50μmol/L Cd+0。2 mmol/L NaHS）共五个处理，每个处理3次重复。

4。3 生理指标的测定

4。3。1 株高的测定

分别在处理后0h、2d、4d、6d、8d、11d测量株高，将每个培养盒中的植株全部测量取平均值，即此培养盒中的株高。

4。3。2 超氧化物歧化酶SOD活性测定

1、试剂的配置

（1） 配置0。05mol/L磷酸缓冲液（PBS，pH7。8）：

A母液：0。2mol/L磷酸氢二钠溶液：取Na2HPO4`12H2O(分子量358。14) 71。7g；     

B母液：0。2mol/L磷酸二氢钠溶液：取NaH2PO4`2H2O (分子量156。01) 31。2g；

分别用蒸馏水定容到1000 mL。

0。05mol/L PBS（ph7。8）的配置：分别取A母液（Na2HPO4）228。75mL，B母液（NaH2PO4）21。25mL，用蒸馏水定容至1000mL。

（1） 配置14。5 mM 甲硫氨酸溶液：取2。1637Met用磷酸缓冲液（pH7。8）定容至1000mL

（1） 配置30µM EDTA- Na2溶液：取0。001 EDTA- Na2用磷酸缓冲液定容至100mL。

（1）配置60µM核黄素溶液：取0。0023g核黄素用磷酸缓冲液定容至100mL，避光保存。

（1）配置2。25 mM 氮蓝四唑 (NBT) 溶液：取0。1840g NBT用PBS定容至100mL避光保存。                                 

2。酶液制备：取0。2g（可视情况调整）样品（新鲜叶片或根系）洗净后置于预冷的研钵中，加入1。6mL 50mmol/L预冷的磷酸缓冲液（pH7。8）在冰浴上研磨成匀浆，转入离心管中在4℃、12000r下离心20min,上清液即为酶液。

3。 反应混合液配置（以60个样为准）：分别取Met溶液162mL，EDTA- Na2溶液0。6mL，磷酸缓冲液5。4mL，NBT溶液6mL，核黄素溶液6mL，混合后摇匀：分别取3mL反应混合液和30µl酶液于试管中，将试管置于光照培养箱中在4000lux光照下反应20min；同时做两只对照管，其中一支试管取3mL反应混合液加入30µLPBS（不加酶液）照光后测定作为最大光还原管，另一支加缓冲液置于暗中测定时用于调零。以不照光的对照管（只有缓冲液并置于暗处）调零后，避光测OD560（出现颜色即可测定）。文献综述