第二章材料与方法 8

2.1实验药品与仪器 8

2.1.1实验试剂 8

2.1.2实验仪器 9

2.1.3实验配制 9

2.2实验方法。

2.2.1基因RS2的提取 10

2.2.2基因4CL的提取 14

2.2.3重组基因RS2-4CL的构建与表达 15

2.2.4白藜芦醇的提取与分离纯化 15

2.2.5用SDS-PAGE检测白藜芦醇的诱导 16

第三章结果与分析 19

3.1重组大肠杆菌的验证 19

3.1.1RS2基因的扩增结果 19

3.1.2载体与RS2的酶切鉴定 19

3.1.3RS2基因与4CL基因对比验证 20

3.2发酵结果及样品检测 21

3.2.1标准曲线的制作 21

3.2.2高效液相色谱检测 22

3.2.3SDS-PAGE结果 26

3.3结果与分析 26

3.4讨论 27

结 论 28

致 谢 30

参考文献 31

第一章绪论

1.1白藜芦醇的概述

1.1.1白藜芦醇的结构与性质

白藜芦醇别名又叫芪三酚，分子式为C14H12O3，分子量为228.24（如图1-1），其性质相对活泼，但并不稳定，水溶性差，在光的照射下容易分解，而且热稳定性也比较差[5]。白藜芦醇是一种存在于植物中的具有芪类特殊结构的酚类化合物，是许多植物受到生物胁迫状况下产生的一种植物抗毒素。

现在通过观察分析发现白藜芦醇在自然状态下主要以顺式白藜芦醇以及反式白藜芦醇两种几何的异构体形式存在。但是由于白藜芦醇中存在芳香环，所以也就存在空间的位阻，因而在结构中反式异构体的稳定性较顺式异构体的来说更加稳定，但通过紫外线处理可以转化为顺式。天然白藜芦醇是无色针状晶体，无味，且熔点在253℃到255℃之间，超过261℃便会升华。研究表明白藜芦醇在高温下稳定性较差，125℃时白藜芦醇在20min内含量降解了17%，50℃时白藜芦醇在20min内降解了39%而在175℃时降解了70%。还有一些研究表明4℃时白藜芦醇在30d内的稳定性比30℃和55℃时都要低[6]。不同的结果让人很难判断温度对白藜芦醇稳定性的具体影响[7]。

1.1.2白藜芦醇的生理活性

（1）抗肿瘤：白藜芦醇的一个最重要的价值就是能够预防癌症的产生[8]。预防癌症的机理其实是白藜芦醇中含有反式白藜芦醇的结构，其结构的特殊性导致了酪氨酸激酶的合成受到了限制，很难再生产出这种物质，因而具有减少患癌症风险的功效[9]。同时科学家在进一步的研究中发现，白藜芦醇主要是通过三个阶段分别为肿瘤的起始、肿瘤的促进和肿瘤的发展的抑制作用从而达成的抗肿瘤作用，但白藜芦醇的抗癌活性主要还是因为它能够对肿瘤细胞的增殖起到一定的抑制作用，使肿瘤细胞无法正常进行增殖或延缓其增殖的速度，同时它对肿瘤细胞具有毒性作用而且能够通过调节许多信号通路暂停细胞生长和细胞凋亡[10]。