MS月季‘真宙’的组织培养研究(2)
1.2外植体对月季组培的影响
外植体的大小以及取材部位、时间等直接影响月季组培的效果，选择合适的外植体是月季组培成功的重要保证。
外植体很小时，有利于培养脱毒的植株。对月季的杉树坏疽环斑病毒（ Prunus necrotic ringspot virus，PNRSV）可通过茎尖培养的方式达到脱毒的目的，如果单纯为了快速繁殖，可用大的茎尖或茎段进行离体培养，这时外植体的大小决定了茎尖的成活比例。一般说外植体愈大，成活率愈高，成苗时间愈短。茎尖在1 ~ 10mm长短时，对形成多芽苗最有效，不但多芽苗所占百分率高，而且每个茎段的侧枝数也比较多。外植体的大小同时影响外植体自身的发育和月季组培苗茎的增殖，外植体的长度在9.0 ~ 10.0mm，直径在3.0 ~ 3.5mm 范围时，茎的增殖和发育是最好的。但Horn对某几种月季进行微繁实验时发现外植体的大小对茎的增殖、叶片数目没有影响，其他一些研究者对只有一个茎节的“Sweet Promise”进行组织培养中得到了类似的结论。
外植体的取材部位对芽的萌发也有影响。很多研究都证明枝条中部的腋芽萌发较顶部和基部时间早，且中部的腋芽长势好，增殖系数高，其次是基部，再次是顶部。
外植体的灭菌方法也会直接影响月季组织培养的效果。外植体灭菌方法很多，使用药剂不一，但其目的是要得到无菌、正常的活体材料，因此应根据材料的不同来决定灭菌程序和处理时间。
1.3不同继代培养基对增殖系数的影响
继代增殖培养受糖浓度、pH 值、激素配比的影响。糖量加大、pH 值降低会使月季继代苗分化率提高20%， 同时可缩短继代周期，但糖浓度不可超过50 g/L，pH 值不可低于5.5。适宜的激素种类和浓度配比是月季腋芽萌发和丛生芽增殖的关键。继代培养中常使用的激素有6-BA、NAA、IBA、GA3，少数采用TDZ、KT、ZT、IAA、ETH。6-BA的有效浓度为0.1～3.0 mg/L，NAA 的有效浓度为0.005～0.5mg/L、也有用到1.0～2.0 mg/L[31]，IBA 的有效浓度为0.01～0.3mg/L。低浓度的6-BA 有利于不定芽的增殖，浓度过高则抑制不定芽增殖；合适浓度的NAA 有利于芽和叶生长，但浓度过高诱导产生大量愈伤组织， 不利于侧芽的直接分化和生长。乙烯也能提高月季芽的增殖率，其效果与浓度有关，以5 mg/L 最佳，但乙烯不利于苗的长高[32]。除受激素的影响外，继代培养还受环境因子的影响。莫磊兴等[28]研究了光照强度对嫩茎增殖的影响， 发现在月季继代培养过程中，光照强度与嫩芽的玻璃化程度有密切关系，光照强度越低，玻璃化程度越重，在光照强度相近的自然散射光和日光灯照射下， 自然散射光的玻璃化率也明显低于日光灯。月季继代培养较适宜的光照是自然散射光3000lx 左右。此外，培养瓶里的含水量、相对含水量、水汽压都会影响月季芽的增殖。继代时间的长短也会对增殖有影响，Chu 等[33]报道将继代时间从3 周延长至6 周，微型月季的增殖率显著提高。还有研究采用摘心等其他方法来提高增殖的。高彩云等[34]在继代培养的接种操作时，切去嫩芽的顶芽后，再转接到新的培养基上，对嫩芽增殖有很大的促进作用。
1.4生根培养基的选择
多数试验采用的生根培养基为1/2MS。Skirvin 等[35]在用Forever yours 月季做生根试验时发现，采用1/4MS 培养基，不添加生长素即可促进生根。Davies[22]在无激素的培养基中添加4%蔗糖，使几个品种的月季全部生根。Hyndman等[36]研究发现，MS 培养基中盐浓度过高，特别是氮素含量过高会导致生根不适应，因此需减少无机盐用量。生根使用的激素主要为IBA、NAA、IAA 等生长素，其中IBA 有效浓度为0.01～1.0 mg/L、NAA 有效浓度为0.01～1.0 mg/L、IAA 使用较少；也有研究采用ABT 的。任文英等[24]采用的丰花月季试管苗生根技术ABT 速蘸法，生根快、整齐，同时在不含激素的培养基中有利新生根的生长发育， 生根阶段试管苗苗高及木质化程度明显提高， 该方法优于普遍采用的将生长素加入培养茎中进行诱导的生根技术。李正平[37]在月季组织培养中使用ABT 生根粉，促进生根浓度为0.5～10.0 mg/L，最佳浓度为0.5～2.0 mg/L。