微生物复合菌肥对温室黄瓜生长的影响(6)
取比色皿两只，一只加入反应混合液3mL和0.02mol•L-1 KH2PO4溶液1mL，作为调零空白；另一只加入反应混合液3mL和上述各组粗酶液1mL，立即开启秒表计时，于分光光度计470nm处比色测定吸光度，每隔1min读数一次。
1.5.4.3 结果计算
以每分钟内OD470变化0.01为1个过氧化物酶活力单位（1U），计算植物材料过氧化物酶的活力。
过氧化物酶活力(U•min-1•g-1FW）=△OD470×VT /（0.01×W×VS×t)
式中：△OD470-反应时间内吸光度的变化量；W-黄瓜叶片鲜重（g)；t-反应时间（min）；VT-提取酶液总体积（mL)；VS-测定时取用酶液体积（mL)。
1.5.5 黄瓜幼苗叶片CAT活性的测定[9-11]
1.5.5.1 试剂
(1)0.05mol•L-1 pH7.5磷酸缓冲液：称取2.99g Na2HPO4•2H2O和0.499g NaH2PO4•2H2O用蒸馏水定容到100mL容量瓶中。
(2)750mmol•L-1 H2O2：取30%的H2O2溶液85g用蒸馏水稀释到1000mL。
(3)50mmol•L-1 pH7.5 Tris-HCl缓冲液：取50mL 0.1mol•L-1 的Tris溶液与40.3mL 0.1mol•L-1盐酸混匀并稀释至100mL。
1.5.5.2 操作步骤
分别从各组幼苗中称取1.00g洗净的植物叶片，剪碎后放入以冷冻过的研钵中，加入少量石英砂和1mL磷酸缓冲液，冰浴研磨成匀浆，倒入离心管中，于4000r•min-1下离心15min，取上清液，即为粗酶提取液。
向一只比色皿中加入3mL Tris-HCl缓冲液作为对照调零；同时取2.9mL Tris-HCl缓冲液，加入50uL粗酶提取液于离心管中，快速混匀，倒入另一只比色皿中，封口，预热5min，然后加入50uL 750mmol•L-1H2O2并开始计时，每隔30s读一次OD240值，连续读数三次。
1.5.5.3 结果计算
以每分钟内OD240降低0.01为1个酶活力单位（1U），计算植物材料CAT的活性。
CAT活力(U•min-1•g-1FW）=△OD240×VT /（0.01×W×VS×t)
式中：△OD240-反应时间内吸光度的变化量；W-黄瓜叶片鲜重（g)；t-反应时间（min）；VT-提取酶液总体积（mL)；VS-测定时取用酶液体积（mL)。
1.6 数据处理
用spss数据处理软件分析试验数据。
2 结果与分析
2.1 微生物复合菌肥对黄瓜幼苗生长指标的影响
表4 微生物复合菌肥对黄瓜生长指标的影响
浓度
(cfu/mL) 茎粗
(mm) 株高
(cm) 湿重
(g) 叶面积
(m2) 叶片数
108 12.2c 11.1c 0.508d 11.4×10-4a 4b
107 13.5b 13.0b 0.78b 10.9×10-4b 4b
106 14.7a 16.2a 0.875a 7.3×10-4c 5a
105 12cd 12.5b 0.67c 5.6×10-4d 4b
清水（CK） 11.4d 9.8d 0.456e 5.23×10-4d 4b
注：同列数据后小写字母表示在0.05水平上差异显著。下同
由表4可知，随菌液浓度的降低，黄瓜幼苗的茎粗、株高和湿重都呈现先增加后降低的趋势，106cfu/mL的菌液处理的黄瓜幼苗茎粗、株高和湿重达到最大，与对照相比，分别提高了28.9%、65.3%和91.9%；随着处理菌肥浓度的降低，叶片面积逐渐变小，108cfu/mL的菌液处理的黄瓜叶片面积达到最大。微生物复合菌液对黄瓜叶片数的影响不显著。