鸭PRKAA2基因多态性研究(2)
2.3 PCR-SSCP结果、测序结果与分析 7
3 讨论 14
3.1 PRKAA2 基因分子遗传特性分析 14
3.2 PCR-SSCP注意事项 14
致 谢 15
参考文献 15
引言
1.我国北京鸭生产与育种发展现状
为了满足我国经济的发展和不断提高的生活水平的要求，同时伴随着鸭肉的烹调方法的迅速普及和推广以及对鸭肉肉质的了解，人们逐渐认识到鸭肉在众多肉类产品中所具有的无可取代的优势，因此鸭肉在中国及世界范围内的消费量呈现快速增长的趋势[1]。鸡在我国的禽业养殖中是最大的养殖群体，而鸭子则是紧随其后的另一大养殖群体，目前在我国,北京鸭又是肉鸭市场中的高销量品种。国外现有的许多优良的鸭子品种，大多是通过有效的选育方式，从北京鸭和其他鸭杂交培育过程中得到的杂交品种。因此可以说，北京鸭对肉鸭业的发展做出了非常巨大的贡献。尽管贡献很大，可现在它自身存在着一个严重问题。最主要因素就是它的选育力，由于选育力低，导致现在市场上的北京鸭的品种没有优势，然而相比之下,国外那些经北京鸭与其他鸭杂交而来的具有优良性状的品种则占据了我国很大一部分生产市场。
从上面内容可知，现有的北京鸭生产远远不能满足人们的需求，这就要求我们去寻找一定的筛选方法，进一步提高选育力，从而找到高生产性能的北京鸭品种，以满足人们的需要。而产肉性能则是一个常被考量的数量性状，由于北京鸭在培育过程中受环境因素影响较大，用常规育种方法进行选育一般效果不是很明显[3.4]，因此近年来，为了提高产肉性能，将动物育种的选育方法在分子水平上进行研究，Yadav等[5]曾通过一定的方法，使品种的培育时间比常规育种几乎缩短了3～5倍，他其主要是通过对所检验的经济性状用候选基因法[6]等方法测定该性状的主效基因，通过以需要检验群体动物作为参考，再结合DNA分子遗传标记法，综合应用这些措施，则可以大大的提高产肉性能。
现在有很多方法可以用以育种的选育，其中一种就是上面提到的候选基因法，候选基因鉴定法（Candidate Gene Approach）是根据已发表的研究成果来推断哪些基因可能与某特定生长性状的形成有关，再通过一定的方法研究该基因在不同个体中可能存在的差异，最后通过统计分析方法验证该基因的变异和目标性状的关联关系，并以此将有效的突变基因作为标记来筛选我们需要的特定生长性状的个体 [7]。这种方法目标明确，因此国内外按照该方法以成功进行了多种物种的选育。而本实验也采用了相似的分析思路，先确定哪些基因可能与饲料利用率有关，从而选定了PRKAA2基因，再从分子水平确定PRKAA2基因中存在的一些突变，在对个体的多个数量性状进行统计分析，最终来确定该基因哪些突变与饲料利用率相关。
2.PRKAA2基因
PRKAA2基因是单磷酸腺苷激活的蛋白激酶α2亚单位(AMPKα2)基因 [8]，AMPK作为一个三聚体的蛋白激酶，它由催化亚基α 、调控亚基β、γ这三个亚基组成，PRKAA2基因是AMPK三聚体中α亚基的一种异构形式，由于AMPK的活性主要受细胞内的2种能量状态ATP、ADP 的调控，因此细胞内 AMPK活性的变化反映了动物体内能量代谢的变化。
目前可以确定的是，α、β亚基均有２种异构形式，即α１、α２和 β1、β２，γ 亚基有３种异构形式，即γ1、γ2和γ3。AMPK是细胞内的能量感受器，它存在于所有真核生物的细胞中。α亚基含有激酶活性调控区，有２种异构形式，AMPK的活性主要是通过α亚基磷酸化来调控的；β亚基含有糖原结合区域，该区域能感受糖原的变化，使糖原在耗尽后能快速恢复并达到正常的水平；γ亚基存有３种异构形式，具有结合 ＡＭＰ和 ＡＴＰ的部位，使其能感受细胞的能量变化。从大量的文献查找可见，现在对于PRKAA2基因的研究大多体现在它与糖代谢的联系上，因此研究领域主要是其与糖尿病的关系。这也同上面的β亚基的结构相联系。然而在肌肉组织中，AMPK最主要的存在形式为α２β２γ３的异构体形式。而α２则是PRKAA2基因编码的，所以PRKAA2的突变可能造成编码蛋白AMPK活性的增强或减弱，从而导致细胞内能量的代谢、细胞的生长发育，近而影响北京鸭鸭肉的形成。因此本实验将研究PRKAA2基因在北京鸭中的单核苷酸突变是否与产肉性状有关系。
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