2.1.2大豆根总RNA提取方法 7

3大豆根总RNA反转录cDNA 8

3.1材料和方法 8

3.1.1实验材料 8

3.1.2大豆根总RNA反转录cDNA方法 8

4 Real-Time PCR检测 9

4.1材料和方法 9

4.1.1实验材料 9

4.1.2 Real-Time PCR 方法（康为cw0956D） 9

4.2 定量分析大豆根盐胁迫响应基因的mRNA表达水平 9

5结果与分析 10

5.1 Ca2+信号转导途径基因的mRNA水平对盐胁迫的响应 10

5.2过氧化物清除关键酶基因的mRNA水平对盐胁迫的响应 11

5.3 查尔酮代谢途径关键酶基因的mRNA水平对盐胁迫的响应 12

5.4其它盐胁迫响应基因的mRNA水平对盐胁迫的响应 14

6讨论 14

参考文献 16

致谢 17

大豆富含油脂、蛋白质和一些有益人体的活性物质，是深受人们喜爱的食用植物油和蛋白制品原料。我国曾是世界最大的大豆生产国和净出口国，但入世以来，我国大豆需求快速增长，进口持续大量增加。据统计，我国大豆表观消费量由2001年的2908万吨增加到2010年6971万吨，但我国本土大豆的种植面积和产量均呈下降趋势，年产量仅为1500万吨左右,因而大豆进口形势日趋严峻，由2001年的1394万吨增加到2010年的5479万吨[1]。欲提高大豆产量，最有效的方式无疑是扩大种植面积。为避免与粮争地，努力提高大豆在盐碱土壤上的适应能力是亟待解决的问题。土壤盐渍化问题在我国乃至全世界都十分严峻。目前，我国18亿亩耕地中有将近一成被盐渍化[2]。这些土壤中含有高浓度的盐分会对作物造成一定伤害，影响作物的生长发育，导致产量下降，大豆则是典型的代表。因此，研究并掌握植物的耐盐机理，利用有效生物措施来提升大豆产量是目前急需解决的问题。

    盐胁迫会影响大豆的生长发育，主要体现在离子毒害、渗透压胁迫以及氧化胁迫三个方面。高盐环境中的植物最先感受到离子毒害，土壤中Na+是对大豆产生伤害的主要离子，高浓度的Na+不仅会破坏质膜上的膜保护酶系统，加剧膜脂过氧化作用，增加膜透性，还会置换质膜上的Ca2+，导致K+、Ca2+外渗引起离子不平衡及矿质营养的失调[3]。另外，有NaCl引起的盐胁迫会改变K+、Ca2+及Mg2+在细胞内的分布，破坏一些阳离子的结合位点[4]。而高盐引起的渗透胁迫会导致大豆的生长受到抑制。此外，离子胁迫以及渗透胁迫会诱发过氧化物的积累，产生二级胁迫——氧化胁迫。因此，植物在生长过程中，主要通过渗透压胁迫适应，排除或区隔化Na+以及清除过量的过氧化物来适应盐胁迫[5]。

大豆在生长进化过程中会形成非常复杂的耐盐机理, 如通过控制Na+的吸收和转运、渗透调节、过氧化物酶调节、代谢产物调节，大分子蛋白质的合成和基因表达等。大豆遇到盐害后，通过这些机制的共同作用，促进提高其耐盐能力。另外，当植物受到盐害、干旱等胁迫时，会启动自身复杂的信号网络来适应盐胁迫。随着植物基因工程技术的发展，科学家们在此方面也取得了一定的研究进展。他们发现与耐盐性相关的信号传导途径有SOS信号途径、MAPK 级联途径、Ca2+及钙调素信号途径等。在本次实验中我们也对Ca2+信号转导途径基因(GmCAx)进行了一定的探索。在大豆中，Ca2+是一种重要的金属离子，调节大豆的生长、发育、衰老以及一些生物胁迫或非生物胁迫。不同类型的Ca2+通道、Ca2+与H+/Ca2+反向转运体遍布在植物的质膜及细胞上，而细胞中的Ca2+自身也悄然发生着变化。Ca2+作为第二信使，主要依赖植物细胞上的Ca2+通道、Ca2+泵和H+/Ca2+反向转运体的这些变化来控制Ca2+的摄入和排出，因此能够随时随地灵活地调节细胞中Ca2+的浓度以及强度, 在植物体内引发相应的级联反应，从而产生生理响应。在拟南芥和大豆中，Ca2+依赖型信号转导通路和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)级联反应途径是参与植物耐盐生理响应的两大类主要信号转导途径[6]。