摘 要：里氏木霉的纤维素酶是一类诱导酶类，在诱导因素下，里氏木霉根据纤维素酶的合成机理合成和表达纤维素酶。但不同的诱导条件下，纤维素酶的合成和表达机理并不完全相同。本实验以温度24℃、27℃、30℃、33℃、36℃为起始培养的温度，培养里氏木霉并测定酶活变化；以起始培养基pH3、pH4、pH5、pH6培养里氏木霉，分别取培养基上清酶液，测定酶活变化。实验结果显示，在温度30℃条件下，pH4酶活相对最高，酶活为5.25U/ml。56799

毕业论文关 键 词：里氏木霉，纤维素酶，温度，pH值，酶活

Abstract：Cellulases from Trichoderma reesei are induced enzymes. With the induced factors, T. reesei expresses cellulase with the synthetic mechanism of cellulases. But under the condition of different inductors, synthesis and expression mechanism of cellulase is not exactly the same. This thesis is trying to determine the optimal fermentation temperature by checking the cellulase activity under the fermentation temperature of 24 ℃, 27 ℃, 30 ℃, 33 ℃ and 36 ℃. This thesis also checked the optimal fermentation pH by monitor the cellulase activity under the fermentation pH of pH3, pH4, pH5, pH6. The experimental results showed that under the condition of the temperature is 30℃ and pH4, cellulase enzyme activity is relatively high, the enzyme activity is 5.25 U/ml.

Key words: Trichoderma reesei, cellulase enzyme, temperature, pH value, enzyme activity

目   录

1 前言 2

2 里氏木霉产纤维素酶的诱导剂的研究 2

2.1材料与仪器 2

2.1.1 PDA培养基 3

2.1.1.1 试剂和材料 3

2.1.2 种子培养基 3

2.1.2.1 玉米浆种子培养基 4

2.1.2.2 基本培养基 4

2.1.2.3 DNS配制 4

2.1.2.4 DNS溶液检验 4

2.1.2.5 柠檬酸缓冲液 5

3 接种方法以及培养 5

3.1 菌种制备 5

3.2 纤维素酶制备 5

3.3 酶活的测定 5

3.3.1 葡萄糖标准曲线 5

3.3.2 滤纸酶活的测定 6

3.4 酶活计算方法 6

4 结果分析 7

4.1 葡萄糖标准曲线 7

4.2 不同的温度条件及pH值对里氏木霉产纤维素酶的影响 7

4.2.1 温度条件为24℃ 7

4.2.2 温度条件为27℃ 9

4.2.3 温度条件为30℃ 10

4.2.4 温度条件为33℃ 11

4.2.5 温度条件为36℃ 12

结  论 14

参考文献 15

致  谢 16

1 前言

纤维素是地球上数量最大的可再生能源物质，中国每年仅农业生产中形成的农作物残渣(稻草、秸秆等)就约有20亿t[1-3]。但由于其木质纤维素含量高，生物降解缓慢，目前对其利用率不高。近年来对纤维素降解方面的研究最经济、环保的方法就是生物降解[4]。利用微生物或其产生的纤维素酶可将纤维素酶解为低分子量的己糖或戊糖，用于生产新型饲料、单细胞蛋白等，将缓解人类面临的粮食、能源及环境危机。