1.4.3 最适pH及pH稳定性

一般情况下，NADH氧化酶的适宜pH值范围都比较宽泛，对于pH值的变化并不十分敏感。大部分NADH氧化酶在pH值为5.0–9.0的范围内，能保持其催化活性，且其最适pH值在6.0–7.5左右。只有在适宜的pH值范围内，酶才能显示其催化活性，过酸或过碱的环境都会改变酶原有的空间构象，造成酶的活力降低或者完全丧失。一般在最适pH值条件下，最有利于NADH氧化酶活性的保持和保存。

1.4.4 辅因子

NADH氧化酶纯化后分别在270nm、380nm、460nm处存在吸收峰，具有黄素蛋白的光谱特性。黄素蛋白种类很多，其辅基有两种，一个是黄素单核苷酸（FMN），另一个是黄素腺嘌呤二核苷酸（FAD），两者都含有核黄素（维生素B2）。辅酶FAD或FMN与酶的蛋白部分通过非共价键相互连接，结合牢固。NADH氧化酶的辅酶主要是FAD，也有少数是FMN。一般情况下，每个亚基对应一个FAD或FMN，单体蛋白则对应一个FAD。另外，大部分的NADH氧化酶分布在细胞质中，细胞膜上也检测出少部分NADH氧化酶酶活，酶的分布位置不同，它的辅因子也有可能不同。

1.4.5 抑制剂

重金属离子如Zn2+，Hg2+，Cu2+对大多数酶都能产生强烈的抑制作用，对NADH氧化酶也是如此[17]。另外，有研究称氨基水杨酸、碘乙酸盐等巯基激活剂可以强烈的抑制NADH氧化酶的活性，其抑制率几乎达到100%[18]。

1.5  NADH氧化酶的生理功能

1.5.1  调节代谢途径

NADH/NAD+是生物代谢过程中一种十分重要的辅酶，它在代谢过程中参与了众多的氧化还原反应。辅因子工程是通过改造微生物细胞内辅因子的再生途径，调控辅因子的形式和浓度，从而定向优化细胞代谢功能，使得代谢流快速高效的导向目标产物[19]。NADH/NAD+作为重要的辅因子，通过调节它们在胞内的比例而调节碳代谢流。

研究表明，光滑球拟酵母糖酵解过程中，由于ATP浓度很高，抑制了糖酵解关键酶丙酮酸激酶和磷酸果糖激酶的活性，而改变NADH氧化途径是既能降低胞内ATP水平又能提供足量NAD+的有效途径[20]。过量表达NADH氧化酶能够改变电子流的走向，从而在产生大量的NAD+的同时又降低ATP的合成速率，大幅度提高糖酵解的速度。

1.5.2 抗氧化机制

微生物细胞需要一些抗氧化机制，能够除去在细胞代谢过程中产生的活性氧，从而减少它们对细胞的毒害[21]。NADH氧化酶在活性氧的脱氧过程中起到重要作用，帮助细胞对抗外界氧压力，保护微生物细胞在高氧浓度的条件下生存。在双歧杆菌耐氧机制的研究中发现[22]，NADH氧化酶的活力与双歧杆菌的耐氧性成正相关。它对氧的敏感性主要是由于它缺乏能有效清除活性氧的机制，它的H2O2和H2O型NADH氧化酶的活力都比较低。文献综述

1.6  研究意义与检测方法

1.6.1 R-扁桃酸脱氢酶的研究意义

R-扁桃酸及其系列化合物是重要的精细化工中间体和药物中间体。目前，R-扁桃酸的现行制备工艺仍以外消旋体拆分为主，拆分试剂昂贵，还会污染环境。需要一种简便易行，条件温和的合成方法。若能提取到R-扁桃酸脱氢酶，则为利用其逆反应生产单一对映体的R-扁桃酸提供了可能。

1.6.2 NADH氧化酶的研究意义

氧化态辅酶NAD+的酶法再生方面，目前已见报道的体系主要有四种：α-酮戊二酸和谷氨酸盐脱氢酶，丙酮酸和乳酸脱氢酶，乙醛和酵母酒精脱氢酶[23]以及NADH氧化酶[24]。其中，谷氨酸盐脱氢酶的成本高，乳酸脱氢酶的氧化还原能力低，酵母酒精脱氢酶则容易失活，可见前三种体系都存在一定的缺憾，而NADH氧化酶构成的辅酶再生体系极具发展前景[25]。H2O2型NADH氧化酶在再生NAD+的过程中会产生过氧化氢，对脱氢酶产生不良影响，若要采用该体系则需另加入过氧化氢酶；H2O型NADH氧化酶在再生NAD+的过程中产物仅为水，无副产物，对反应体系无影响，最适合用于辅酶再生。目前，还未见报道出现NADH氧化酶的商业化产品。