1.1  研究进展

因为十大功劳叶的药用作用的应用，很多人对十大功劳叶进行了研究，目前，关于十大功劳叶成分的分析报道很多，但目前仅有关于小檗碱等生物碱的有关报道，其他化合物成分还未见报导[3]。本实验通过硅胶柱色谱、薄层色谱以及HPLC高效液相色谱法，对十大功劳叶中化合物成分进行研究，主要是先对化合物成分进行粗略的分离。

1.2   色谱法

是根据物理化学性质的不同，将物理化学性质相似的化合物从混合物中分离的一种方法。它具有分离和分析两种功能，能够避免各组分之间的干扰，并且较准确的对每一组分进行定量和定性分析，从而得到纯组分。因而对物理化学中的样品进行分析等方面得到了广泛的应用[4]。

1.3  发展

层析的出现是从1903年开始的，是一位俄国植物学家Michael Tswett发现，当向碳酸钙色谱柱中加入植物色素的石油醚萃取物，然后使用洗脱剂（石油醚）进行洗脱时，柱中会出现数条色带，层析因此开始出现。但当时并未受到重视[5]。直到1931年，αβ胡萝卜素从氧化铝和碳酸钙柱中分离出来，色谱技术才真正受到科学家的重视，并开始进一步研究。1938年开始出现液相色谱，代替了原来的色谱技术，使色谱法的使用范围更加广泛，无色物质也可以使用。20世纪40年代，利用硅胶进行的液液分配色谱开始出现，进一步扩大了色谱法的使用范围，使得色谱法逐渐成为一种对样品分离和分析的重要手段。在次基础上，先后又出现了纸色谱、薄层色谱和各种类型的色谱方法。20世纪50年代初，气相色谱被广泛运用于化学分析。主要采用了高灵敏度的检测器以及自动记录装置，具有速度快，效率高等优点，标志着色谱技术开始趋于自动化。然而，气相色谱也具有一定的局限性，比如一些难以气化和热稳定性不强的物质就难以使用气相色谱。直到20世纪60年代末，高效液相色谱的出现，很好的解决了这个问题，它具有液相和气相色谱两者的优点，是目前主要采用的一种高灵敏度的色谱方法。

本文主要采用硅胶柱色谱、薄层色谱和高效液相色谱对十大功劳叶中化合物进行逐步分离纯化。文献综述

1.4  硅胶柱色谱

硅胶柱色谱的原理是利用混合物中的各组分对固体吸附剂（硅胶）的吸附能力不同而达到分离目的的层析方法。操作流程主要有装柱、加样、洗脱三个方面。硅胶色谱法的有点有分离速度快、效率高、分离效果明显等，目前被广泛应用于生物活性物质的分离等。本文采用正相硅胶柱色谱分离十大功劳叶中化合物成分，正相硅胶柱主要先洗脱极性较小的有机物，一般情况下，正相硅胶色谱运用比较广泛[6]。

1.5  高效液相色谱

高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，主要由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪及部分组成。流动相为液体，经高压输液系统泵入装有固定相的色谱柱中，该液体流动相为单一溶剂或者具有不同极性和比例的混合溶剂等。分离完之后，将组分泵入检测器进行检测分析[7]。

高效液相色谱主要适用于分子量比较大、热稳定性差、高沸点物质的分离和分析，被广泛应用于稠环芳烃、核酸、肽类、抗氧化剂等物质的分析。高效液相色谱作为一种重要的分析方法，被广泛应用于生物和化学分析中。

2 实验部分

2.1  实验仪器与材料

实验仪器：

1260高效液相色谱仪               美国安捷伦

CBIO21多功能暗箱式紫外分析仪    北京赛百奥科技有限公司