最佳时间的测定:吸取0.1mL 1mg/mL羧苄西林钠溶液于试管中,再加入0.9mL的蒸馏水,然后加入5mL试剂A,室温(15℃)静置10min后,加入0.5mL试剂B(福林酚显色剂)后立即混匀,室温(15℃)静置30min显色后,将试剂空白作参比,在分光光度计下进行760nm的测定。文献综述

试剂A用量的测定[10]:吸取0.1mL 1mg/mL羧苄西林钠溶液于试管中,分别加入1mL、3mL、5mL、6mL、7mL、8mL、9mL试剂A,室温(15℃)静置10min后,加入0.5mL试剂B(福林酚显色剂)立即摇匀后,室温(15℃)静置30min(其中羧苄西林钠的用量:试剂A的用量:试剂B的用量为1:10:5、1:30:5、1:50:5、1:60:5、1:70:5、1:80:5、1:90:5,总体积为10mL,不足的用蒸馏水补足),将试剂空白作参比,在分光光度计下进行760nm的测定。

2.2.3 试剂B最佳温度和时间、用量的确定。

最佳温度和时间的测定[10]:吸取0.1mL 1mg/mL羧苄西林钠溶液于试管中,再加入0.9mL的蒸馏水,然后加入5mL试剂A,室温(15℃)静置10min后,加入0.5mL试剂B(福林酚显色剂)后立即混匀后,分别在不同温度(30℃、40℃、50℃、60℃、70℃)水浴锅中水浴不同时间(10min、20min、30min、40min、50min、60min)显色后取出,将试剂空白作参比,在分光光度计下进行760nm的测定。

试剂B用量的测定:吸取0.1mL 1mg/mL羧苄西林钠溶液于试管中,再加入0.9mL的蒸馏水,然后加入5mL试剂A,室温(15℃)静置10min后,分别加入0.1mL、0.3mL、0.5mL、0.7mL、0.9mL试剂B(福林酚显色剂)立即摇匀后,在30℃水浴锅中水浴30min,将试剂空白作参比,在分光光度计下进行760nm的测定。

2. 3 方法评价[8,12~13]

2.3.1 稳定性试验

取0.1m l 1mg/mL羧苄西林钠溶液于试管中,再加入0.9mL的蒸馏水,然后加入5mL试剂A,室温(15℃)静置10min后,加入0.5mL试剂B(福林酚显色剂)立即摇匀后,在30℃水浴锅中水浴30min,将试剂空白作参比,分别在放置0min、30min、60min、90min、120min后,在分光光度计760nm下测吸光度,以评价该比色法在一定时间内的稳定性。

2.3.2 重现性试验来!自~优尔论-文|网www.youerw.com

分别配制5个1mg/mL羧苄西林钠溶液,依照上述的方法分别测出其OD值,然后算出其羧苄西林钠的含量值,并计算测定结果的相对偏差(RSD),以评价该方法的重现性。

2.3.3 精密度试验

用福林酚比色法对同一个1mg/mL羧苄西林钠溶液,依照上述方法,5次测定其OD值,然后算出其羧苄西林钠的含量值,并计算测定结果的相对偏差(RSD)来评价该方法的精密度。

3 结果与分析

3.1 最佳测定波长的确定

将羧苄西林钠与福林酚试剂反应后,用分光光度计,在400~800nm范围内扫描出来的结果见图1。如图1所示,羧苄西林钠溶液经过显色反应后,最大吸收峰在760nm处,因此以760nm作为最大吸收波长。

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