2.3.3酶催化合成头孢羟克洛实验

对母核7-ACCA和侧链4-OH-PGME按一定比例称取，并分别加纯水溶解（7-ACCA可加入少量氨水帮助溶解），再加0.1 mM KPB 5 mL，调溶液pH，定容50 mL，从定容好的溶液中取样100 μL并加入0.5 mL 95% 乙醇，混匀。称取一定重量的固定化青霉素酰化酶，将低温冷却液循环泵调至目标温度，待水温达到目标温度，将定容好的溶液和固定化青霉素酰化酶倒入反应罐中，开启电动搅拌器，设定好转速160 r/min。反应初期30 min取样一次，反应后期1 h取样一次，加入0.5 mL 95% 乙醇终止反应。来!自~优尔论-文|网www.youerw.com

从每只终止反应后的样品中取100 μL加入0.4 mL纯水和3.5 mL PDAB，混匀，静置5分钟（空白液中只加入0.5 mL纯水，做OD调零使用）。

记录下不同时刻OD值，直到OD值出现最小值后反应趋于稳定终止反应，记录OD值达到最小时的反应时间。

3  结果与分析

实验考察了投酶量、7-氨基-3-氯-头孢烯酸（7-ACCA）和D-对羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐（4-OH-PGME）投料比、反应温度、反应 pH 等对7-ACCA转化率的影响，其目的是找到酶促合成头孢羟克洛的最佳条件。