乌苏里拟鲿以其肉质细嫩、味道鲜美、高营养而备受欢迎[6]。但是随着滥捕现象日益严重，野生乌苏里拟鲿数量锐减。因此，为了改变这种现状，急需对乌苏里拟鲿采取人为的技术手段，使自然资源得到恢复和修养，并在其基础上进行人工繁殖，将其开发成为新的养殖对象，以满足市场的需求，使乌苏里拟鲿这一重要的经济鱼类资源逐步形成良性发展和利用的格局[7]。

鱼类性腺分化包括形态学分化和细胞学分化两方面[8]。鱼类性腺形态学分化早于细胞学分化。形态学上分化是以性腺的形态结构作为性腺分化的标志，卵巢分化的主要标志是以卵巢腔和血管的出现；而其精巢分化是以输精管原基和血管的出现作为分化标志。当血管位于生殖腺的中央时，该生殖腺有向卵巢分化的趋势，当血管位于生殖腺的背部时,该生殖腺有向精巢分化的趋势[9]。细胞学分化是以性腺中出现性母细胞为标志[10]。

本文通过光学显微镜对乌苏里拟鲿的性腺进行组织学观察，深入了解乌苏里拟鲿性腺的组织结构，初步确定乌苏里拟鲿精巢、卵巢的分化时间和各自的特点，为乌苏里拟鲿的人工繁殖提供理论基础。

1  材料与方法

1.1  材料

试验用乌苏里拟鲿通过人工授精、孵化获得。对孵出4d至25d仔鱼每天取样，孵出25d后，每隔1d取样一次，取至54d，每次随机10条。将材料投入波恩氏固定液中进行固定，固定24 h，以保存组织内细胞原有的结构和形态，使其与生活时相似。文献综述

1.2  实验试剂与器材

各级浓度酒精、二甲苯、石蜡、蒸馏水、苏木精染液、伊红染液、树胶、手术刀、小酒盅、恒温箱、超净工作台、恒温水浴锅、酒精灯、切片机、镊子、毛笔、解剖针电子显微镜等等。

1.3  实验步骤

1.3.1  脱水

石蜡切片法就是使石蜡浸入组织，已达到支持增硬的作用，但时石蜡与水不能混合，因此，要先将组织中的水分出去，及脱水。依次经过：80%酒精→85%酒精→90%酒精→95%酒精Ⅰ→95%酒精Ⅱ→无水酒精Ⅰ→无水酒精Ⅱ。每级30 min，注意脱水时要轻拿轻放，每一级酒精脱水后吸去多余水分。

1.3.2  透明

酒精与石蜡不能混合，通过透明替代酒精，有利于石蜡的渗入。依次经过：酒精:二甲苯 1:1（20 min）→酒精：二甲苯 1:2（15 min）→二甲苯Ⅰ（10 min）→ 二甲苯Ⅱ （5 min）

1.3.3  浸蜡

为了除去透明剂，使石蜡渗入整个组织中，获得一定的硬度和韧度，以便切成薄片。浸蜡的过程在恒温箱65℃下进行，依次经过：二甲苯：石蜡 1:1（20 min）→二甲苯：石蜡1:2（20 min）→石蜡Ⅰ（50 min）→石蜡Ⅱ（60 min）

1.3.4  包埋

将热蜡导入小酒盅中，用镊子轻夹住材料尾部放入其中，头部朝下，使鱼身垂直。待

其表面冷却后放入凉水中充分冷却。包埋过程要在恒温箱中进行。

1.3.5  切片 

先将蜡块用手术刀切成上下两边平行的正方形，将休整后的蜡块黏在小木块上，小木块装在切片机上，以待切片。将切片机调至5μm，切下的蜡带用毛笔轻轻取下放在铺有一层蒸馏水的载玻片上，放在水浴锅上延展。延展后，用滴管吸去多余水分，放在37 ℃的恒温箱中干燥。来!自~优尔论-文|网www.youerw.com

1.3.6  染色

依次经过：纯二甲苯（1 h）→无水乙醇Ⅰ（3 min）→无水乙醇Ⅱ（3 min）→95%乙醇Ⅰ（3 min）→95%乙醇Ⅱ（3 min）→80%乙醇（3 min）→70%乙醇（3 min）→50%乙醇（3 min）→30%乙醇（3 min）→蒸馏水（3 min）→苏木精染液（1 min）→自来水冲洗（10 min）→30%乙醇（3 min）→50%乙醇（3 min）→70%乙醇（3 min）→80%乙醇（3 min）→95%乙醇Ⅰ（3 min）→伊红染液（15 s）→95%乙醇Ⅱ（3 min）→无水乙醇Ⅰ（3 min）→无水乙醇Ⅱ（3 min）→二甲苯（3 min）