西蒙斯氏柠檬酸盐培养液(作柠檬酸盐利用试验):柠檬酸钠2g,NaCl5g,MgSO4·7H2O0.2g,K2HPO4·3H2O1g,(NH4)2HPO41g,1%溴麝香草酚蓝水溶液10mL,琼脂15-20g,自来水1000mL,pH为7.0,121℃灭菌20min。

淀粉牛肉膏蛋白胨琼脂培养基:用可溶性淀粉2g,牛肉膏3g,蛋白胨10g,NaCl5g,琼脂15-20g,蒸馏水1000mL,pH为7.2-7.4。

明胶培养基(做明胶液化试验用):牛肉膏3g,蛋白胨10g,明胶12g,蒸馏水1000mL,pH为7.0。

高盐培养基(做耐盐试验):牛肉膏3g,蛋白胨10g,NaCl2g、5g、7g,琼脂15~20g,蒸馏水1000mL,pH为7.2-7.4。

半固体培养基(作运动性实验):琼脂含量为0.5%,其他组分的比例按牛肉膏蛋白胨培养基来配制。

2.2 实验步骤

2.2.1 土壤悬液样品的制备

称5g土壤样品于装有45mL无菌水的100mL锥形瓶中,放入玻璃珠与土壤悬液,一起振荡,制成土壤悬液。吸取上清液0.5mL加到含有49.5mL无菌水的三角瓶中,配成10-2g/mL的土壤悬液,并进一步稀释至10-3g/mL、10-4g/mL,10-5g/mL,10-6g/mL和10-7g/mL,共六个浓度梯度。注意:操作时,每一个稀释度换用一只枪头,每次吸入液体后,要将枪头插入液面,吹吸几次,可让液体混合均匀。来!自~优尔论-文|网www.youerw.com

2.2.2 分离纯化

2.2.2.1 菌株的分离

分别吸取10-5 ~10-7的土壤悬液0.1~0.2mL于牛肉膏蛋白胨琼脂平板上,用无菌玻璃涂棒涂布均匀。用涂布器在平板表面轻轻地来回推动,使之均匀分布。将涂有菌液的平板培养基放置在37℃恒温培养箱中培养36h。观察平板培养基中菌落的形态、颜色,将单个菌落接种至已制成的斜面培养基中,编号1,2,3……7,编号后放置在37oC恒温培养箱中培养36h,然后放入冰箱中保存,备用。

2.2.2.2 可降解羽毛菌株的筛选

取羽毛4cm于LB培养基中,将培养好的菌株无菌操作加入培养基中,然后于摇床培养,观察羽毛是否降解,筛选出可降解羽毛的菌株。

2.2.3 菌株保存

将筛选出的菌株所编号的斜面培养基,4℃下保存待用。    

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