西蒙斯氏柠檬酸盐培养液（作柠檬酸盐利用试验）：柠檬酸钠2g，NaCl5g，MgSO4·7H2O0.2g，K2HPO4·3H2O1g，(NH4)2HPO41g，1%溴麝香草酚蓝水溶液10mL，琼脂15-20g，自来水1000mL，pH为7.0，121℃灭菌20min。

淀粉牛肉膏蛋白胨琼脂培养基：用可溶性淀粉2g，牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl5g，琼脂15-20g，蒸馏水1000mL，pH为7.2-7.4。

明胶培养基（做明胶液化试验用）：牛肉膏3g，蛋白胨10g，明胶12g，蒸馏水1000mL，pH为7.0。

高盐培养基（做耐盐试验）：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl2g、5g、7g，琼脂15～20g，蒸馏水1000mL，pH为7.2-7.4。

半固体培养基（作运动性实验）：琼脂含量为0.5%，其他组分的比例按牛肉膏蛋白胨培养基来配制。

2.2 实验步骤

2.2.1 土壤悬液样品的制备

称5g土壤样品于装有45mL无菌水的100mL锥形瓶中，放入玻璃珠与土壤悬液，一起振荡，制成土壤悬液。吸取上清液0.5mL加到含有49.5mL无菌水的三角瓶中，配成10-2g/mL的土壤悬液，并进一步稀释至10-3g/mL、10-4g/mL，10-5g/mL，10-6g/mL和10-7g/mL，共六个浓度梯度。注意：操作时，每一个稀释度换用一只枪头，每次吸入液体后，要将枪头插入液面，吹吸几次，可让液体混合均匀。来!自~优尔论-文|网www.youerw.com

2.2.2 分离纯化

2.2.2.1 菌株的分离

分别吸取10-5 ～10-7的土壤悬液0.1～0.2mL于牛肉膏蛋白胨琼脂平板上，用无菌玻璃涂棒涂布均匀。用涂布器在平板表面轻轻地来回推动，使之均匀分布。将涂有菌液的平板培养基放置在37℃恒温培养箱中培养36h。观察平板培养基中菌落的形态、颜色，将单个菌落接种至已制成的斜面培养基中，编号1，2，3……7，编号后放置在37oC恒温培养箱中培养36h，然后放入冰箱中保存，备用。

2.2.2.2 可降解羽毛菌株的筛选

取羽毛4cm于LB培养基中，将培养好的菌株无菌操作加入培养基中，然后于摇床培养，观察羽毛是否降解，筛选出可降解羽毛的菌株。

2.2.3 菌株保存

将筛选出的菌株所编号的斜面培养基，4℃下保存待用。