2                                dNTP                          5μL

3                               MgSO4                                       3μL

4                               前引物                          1μL

5                               后引物                          1μL

6                                cDNA                          1μL

7                               KOD酶                         1μL

8                                 H2O                          33μL

表4  PCR条件设置

Table 4  PCR conditions set

编号                             温度                         时间

1                               94℃                         2min

2                               98℃                          10s 

3                               56℃                          30s                                                                    

4                               68℃                        1min45s   

5                           2-4循环35次

6                               94℃                         2min    

7                                4℃                          ∞

2.2.4 PCR产物的连接与转化

试剂：Taq酶、SolutionⅠ、PMD18-T、DEPC水、DNA ligation Kit Ver. 2.0试剂盒（TaKaRa）、感受态大肠杆菌、LB培养基。

方法：（1）连接：a：25μL PCR加A尾体系如表5，72℃，30min后做连接。

                  b：使用DNA Ligation Kit Ver. 2.0试剂盒对以上步骤中获得的SlNAC10基因的纯化PCR产物和PMD18-T载体进行连接。体系如表6所示，16 °C连接过夜。