β-1,4-内切葡聚糖酶可特异性作用于β-1,4-葡萄糖苷键,使其内部的β-l,4-糖苷键水解,生成纤维二糖与纤维寡糖等短链低聚糖;β-l,4-糖苷键把这些短链低聚糖继续降解为两个葡萄糖分子[13]。

秸秆多种多样,包括稻草、麦秸、玉米秸、大豆秸等,其主要成分是木质素、纤维素、半纤维素等聚合而成的致密碳水化合物以及少量蛋白质、脂肪、木质素、醇类、醛、酮和有机酸[14]。不同秸秆其组成成分和比例也不同,其主要成分是纤维素,其次是半纤维素和木质素,不同植物体残体中这3种物质的比例是不同的。

1.2.2  纤维素酶的性质

细菌产生的纤维素酶量少,主要是内切酶,大多数对结晶纤维素没有活性,而且不能分泌到细菌细胞外,常常聚集形成多酶复合体。真菌能产生大量的纤维素酶,产生的酶组分全能分泌到菌体外,一般不聚集成多酶复合体,但可以相互发生强烈的协同作用[14]。

2  材料与方法

2.1  材料

2.1.1  菌株

所用菌种为实验室保藏的内切葡聚糖酶重组马克斯克鲁维酵母

2.1.2 主要仪器及设备

2S-75HJ型高压灭菌锅:江阴滨江医疗设备有限公司

SW-CJ-IFD型单人单面净化工作台:苏州净化设备有限公司

SPX-250B生化培养箱:上海佳胜实验设备有限公司

HD-930型组合式全温摇床:太仓市博莱特实验仪器厂,

电子天平BS210S:北京赛多利斯天平有限公司

高速冷冻离心机HR21M:湖南赫西仪器设备有限公司

HD-930DHG-9240A型电热恒温鼓风干燥箱:上海精宏实验设备有限公司

EPED-E2-10TF纯水仪:南京易普易达科技有限公司

雷磁pHS数显pH计:上海精密科学仪器有限公司

HH-S恒温水浴锅:金坛市亿通电子有限公司

722S型可见分光光度计:上海精密科学仪器有限公司

2.2  主要试剂以及培养基的配制

2.2.1主要试剂

1.0.1M 磷酸缓冲液(PBS)(PH=6.0):1L蒸馏水中加入13.682g 二水磷酸二氢纳和4.405g十二水磷酸氢二钠充分溶解。

2.乙酰胺:将装有乙酰胺的瓶子在121℃下高温灭菌20min,在100mL的0.1M磷酸缓冲液(pH=6.0)中加入1.475g乙酰胺,在超净工作台上点燃酒精灯,用针管吸取配好的溶液装上200微升的过滤芯,将溶液过滤到灭菌后的瓶子中,冻存备用。来`自^优尔论*文-网www.youerw.com

3.DNS:蒸馏水1416mL、氢氧化钠19.8g、3,5-二硝基水杨酸10.6g混合,溶解后加入酒石酸钾钠306g、苯酚(50℃溶化)7.6mL、偏重亚硫酸钠8.3g,用5-6mL,0.1M的HCl对3mL配好的溶液进行滴定,用苯酚作指示剂,溶液从红色变成原有的颜色。如果有必要时还需要加入氢氧化钠,配好的DNS分装后需避光。

4.柠檬酸缓冲液(50mM,pH4.0):A溶液:1.0505g柠檬酸溶于50mLddH2O。B溶液:1.4705g柠檬酸钠溶于50mLddH2O。从A溶液中取32.75mL,B溶液中取17.25mL,两者混匀,再加入50mLddH2O。

5.2% CMC( w/v)(羧甲基纤维素纳)溶液:称量2g CMC-Na(800mPa-s~1200mPa-s),加入约80mL柠檬酸缓冲溶液(50mM,pH4.0),50℃边水浴边搅拌溶解,完全溶解后定容至100mL,储存于冰箱中备用。

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