2.2常山胡柚幼茎培养结果 7

2.3常山胡柚幼胚培养结果 8

3  讨论 11

参考文献： 12

致谢 13

引言

常山胡柚（Citrus changshan-huyou Y. B. Chang, sp. Nov）是中国柑橘属的一个新种，为原产于浙江常山县的特有杂柑类良种[1]。在3月下旬开始发芽，4月初会出现花蕾，开花期从4月下旬开始，持续至5月上旬，在5月中上旬基本完成生理落果，持续时间约1周，到6月底基本进入定果期。一般到11月上中旬成熟采收。其果实饱满，外观呈鲜黄色，香味浓郁，果粒呈金黄色，汁液饱满，味道酸甜适中，微甘[2]。不仅口感良好，常山胡柚还含有人体所必需的6种氨基酸及多种维生素，且有较强的药理作用，具有清凉去火论文网、平咳化痰、生津止咳、润喉醒酒和降低血糖等功效。与其他果实不同，常山胡柚的耐储存性较高，若不加任何处理，只需将果实堆放在室内较为阴凉处或挖土坑储藏，就可以保存至次年的4~5月[3]。因此，它在水果市场中深受广大群众欢迎，体现出了良好的经济效益。

近年来常山县加大了胡柚果园建设力度，常山胡柚的种植面积不断扩大；而且，相关方面也更加重视胡柚的产量及果实质量。但是，经几代繁殖后的胡柚果树，不易保存其母本的一些优良性状，所结果实味道不佳，因而果农常常采用扦插繁殖。但扦插育苗需时较长，繁殖速度太慢，不足以适应常山胡柚生产发展的需要。为了能够在更短的时间内，保质保量地进行胡柚良种繁殖，我们提出了采用组织培养的方式培育种苗的想法。

此次研究中使用最多的植物激素是6-BA，它是一种人工合成的细胞分裂素，在组织培养中可以诱导愈伤组织的形成。针对实验材料的种类不同及成熟程度不同，6-BA的最佳使用浓度也不一样,0.02～2.0 mg/L都有使用。这项研究以常山胡柚的幼茎、幼叶、幼芽和幼果等不同的器官为外植体进行组织培养，先诱导形成愈伤组织，然后在愈伤组织的基础上诱导分化出丛生芽，最终获得了常山胡柚的再生苗，此项研究旨在建立一个快速、高效、优质的常山胡柚种苗产业化生产体系。这既是果农的迫切需要，也是现今市场的需求。

1 材料与方法

1.1  实验材料

选择常山胡柚的幼茎、幼叶、幼芽和幼果等不同的器官作为外植体。具体为，将常山胡柚种植于实验大棚中，适时浇水保持其生长状况良好。在3月下旬胡柚的发芽期间，剪取获得胡柚幼茎、幼叶、幼芽。若为处于发芽期，胡柚无新芽，则可对胡柚进行打顶处理，经2周会长出新芽，经3~4周可获得适合实验的幼茎和幼叶。胡柚开花后3个月左右会结出幼果，选用直径大小在2~3 cm的幼果，剥出的幼胚，大小一般在1~3 mm，待用。文献综述

1.2  培养方法 

1.1.1 外植体消毒

用经无菌水稀释5倍的次氯酸钠溶液（含有效氯100~140 g/L）处理胡柚材料，幼叶片处理5~10 min，幼茎处理10~15 min，幼芽根据幼嫩程度处理2~5 min。然后用无菌水将处理后的材料清洗3~5次，用滤纸吸干表面多余的水分。胡柚幼果用洗洁精洗净浸泡5 min后，用蒸馏水冲洗干净，在超净台中，剥出幼胚，用稀释5倍的次氯酸钠溶液（含有效氯100~140 g/L）处理1~2 min，无菌水冲洗3~5次，用滤纸吸干表面多余的水分。根据果实的不同成熟程度，有时会剥出完整的种子。用稀释5倍的次氯酸钠溶液（含有效氯100~140 g/L）处理10 min，无菌水冲洗3~5次，用滤纸吸干表面多余的水分。