4.5 质粒的提取 12

4.6 基因的测序 13

4.7 SlERF16基因的生物因信息学分析 13

5 结论 18

参考文献 20

致谢 23

图清单

图序号 图名称 页码

   图4-1 番茄根茎叶RNA的提取 11

图4-2 Primer Premier 5软件设计SlERF16特异性引物图 11

图4-3 SlERF16基因全长CDS克隆电泳图 12

图4-4 SlERF16基因的菌落PCR电泳图 12

图4-5 SlERF16基因连入T载体后的质粒电泳图 13

图4-6 SlERF16 基因的测序结果 13

图4-7 SlERF16基因ORF预测 14

图4-8 SlERF16蛋白的保守结构域分析 14

图4-9 SlERF16蛋白的疏水性分析 15

图4-10 SlERF16蛋白的酸化位点分析 16

图4-11 SlERF16蛋白的二级结构分析 17

图4-12 不同植物中ERF蛋白的多重序列比对分析 17

表清单

表序号 表名称 页码

表4-1 SlERF16蛋白亚细胞定位预测结果 16

1绪论

反式作用因子即转录因子，是一种DNA结合蛋白[1]，是为了保证目的基因能够以特定的强度，空间与时间呈现，从而能与顺式作用元件发生特异性结合的转录因子[2]。AP2/ERF转录因子家族群的一种主要亚家族是ERF家族, ERF（ethylene-responsive element）是由Ohme-Takagi和Shinshi提出，他们发现GCC盒在大量烟草碱性PR基因的启动子中起作用，将这种作用命名为ERF[3] [4]。并从烟草中分离出了4个cDNA基因，它们编码出的GCC 盒结合蛋白, 命名为EREBP（乙烯应答元件结合蛋白）。通过研究，分析其编码出来的序列,发现它们中都含有一个高度保守的氨基酸区域，在这个区域当中含有58或59个氨基酸, 通过研究这些氨基酸的结构功能发现它们其实就是与GCC盒特异性结合的区域，将该区域称为ERF结构域,并将其中含有ERF结构域的蛋白称为ERF蛋白，它对非生物逆境反应和调节植物生物有着重要意义。目前番茄中分离到大量编码ERF蛋白的基因[1][5]，完整基因组序列提供了一个重要机会识别和描述全基因组基因[6]。现在提高农作物抗逆境的一个重要突破口是将ERF基因进行分析和克隆。植物重要基因的克隆和精细定位已成为目前植物功能基因组学研究热点之一，目前为止已有数十种技术已经运用到基因的克隆中来，包括转录，反转录，菌落PCR，荧光定量PCR，质粒PCR等。论文网

植物在他们的生命周期里会受到各种非生物压迫[7]，如干旱、盐碱、极端温度（cold and heat）[8]等，不断变化的全球气候可能加剧这些压力[9]。非生物压力是目前的一个主要因素导致全球农业减产，并能减少大多数主要农作物的产量高达50%[10]。低温限制可耕种的土地面积,导致每年的生产力损失价值数千亿美元在世界范围内,影响生产的质量。通过育种和工程研究植物应对寒冷和创建耐寒作物具有十分重要的现实意义。植物为了生存会进化形成一个有效的信号转导网络来获知环境中的变化[11]。最近的研究表明，转录因子(TF)在植物应激反应扮演重要角色。转录因子结合蛋白调节基因表达在转录水平，他们负责选择性调控经常表达的组织[12]。于是植物在进化过程中就会形成各式各样的防卫胁迫措施[13]。各式各样胁迫信号被植物识别、然后植物激活自身相应的信号转导途径、诱导大量植物本身防卫反应基因的表达，从而使植物抗逆性得到展现。研究植物抗逆基因的转录调控目前是植物防卫反应研究中最具发展潜力的领域之一[14]，通过转录因子来改良植物的综合抗病性，是非常有潜力的研究领域[15]。文献综述