2 杭白菊病原真菌药物敏感性测定

2。1 材料与方法

2。1。1 供试材料

真菌材料：从表现叶片边缘枯萎皱缩、严重枯黄、有黄褐色病斑及枯死症状的杭白菊植株叶片上分离纯化所得病原菌26株。

试剂：Taq DNA polymerase购自北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司；PCR产物克隆试剂盒购自生工生物工程（上海）股份有限公司；主要化学农药见表2。1；EC50值测定所有的药剂为原药，包括有效成分98%的多菌灵和有效成分91。5%的戊唑醇其余常用化学试剂均由浙江省药用植物种质改良与质量控制技术重点实验室提供。

表2。1 供试农药及浓度来*自-优=尔,论:文+网www.youerw.com

供试农药 生产厂家。 剂型* 浓度μg ml-1

80%多菌灵（Carbendazim） 江苏省太仓市农药厂有限公司 WP 0、0。1、1、10、50

50%腐霉利（Procymidone） 日本住友化学工业株式会社 WP 0、0。1、2

500g/L异菌脲（Iprodione） 拜耳作物科学（中国）有限公司 SC 0、500、104

91。5%戊唑醇（Tebuconazole） 盐城利民农化有限公司 TC 0、1、10

*注：WP：可湿性粉剂；SC：悬浮剂；TC: 原药

2。1。2 四种杀菌剂敏感性的初步测定

结合实地调查、相关文献查找以及预实验结果，设计农药戊唑醇（Tebuconazole，Teb）、异菌脲（Iprodione，Ipr）、腐霉利（Procymidone，Pro）、多菌灵（Carbendazim，Car）的浓度梯度（见表2。1），对所分离出26株真菌进行了药物敏感性测定。

采用平板培养技术进行药敏性测定。配制含不同处理浓度杀菌剂的PDA平板，并以未加杀菌剂的PDA平板作对照，同一条件下接种直径为0。5 cm的病原真菌菌块，于25 ℃恒温黑暗倒置培养，待对照组真菌生长接近平板边缘时，采用十字交叉法进行测量统计及拍照记录，每个处理重复5次。以未添加药物的平板为对照，将高浓度下仍能快速生长的菌定为抗性菌，将低浓度下生长缓慢的菌定为敏感菌，从而分别统计两类菌的频率。