理想内源性标志物通常具有以下优势:⑴对于肾小球滤过功率有稳定的生成量;⑵可以维持相对平衡的血浓度,不受其他病理变化的影响,不与蛋白随意结合;⑶在肾小球中自由滤过;⑷肾小管不分泌、不重吸收;⑸无肾外清除状况。

胱抑素C( cystatin c)是一种良好的半胱氨酸蛋白酶抑制剂，是一种非糖基化的碱性蛋白质,由120 个氨基酸组成， 胱抑素C在体内产生速率稳定,影响因素极少,是反映早期肾小球滤过功能受损的可靠的指标。Cys C的作用似乎是通过抑制溶酶体酶[1]控制炎症。它也可能具有抗菌或抗病毒的作用[2]。Cys C在人体多种组织中的表达及分泌体液中的浓度高。Cys C的血浓度几乎完全取决于肾小球滤过率(GFR),基本上不受饮食或营养状况的影响。此外,Cys C的血浓度也是独立的,肌肉质量、年龄或性别,没有任何影响。因此,与上述条件相契合的CysC被作为评价肾小球滤过率(GFR)新的敏感指标。

血清肌酐水平已被用于诊断肾功能几十年——它通常用于敏感测量血清肌酐水平和肾功能早期变化。最近研究表明,在血清肌酐增加之前的1天或2天,血清Cys C明显降低。许多研究也表明其可以检测GFR降低时肌酐的较小改变。因此,血液或尿Cys C浓度变化与肾功能不全程度和急性肾小管损伤的严重程度密切相关。论文网

此外，在临床研究中发现，血清CysC表达可参与肿瘤发生,在恶性肿瘤中,血清CysC的浓度明显升高。[3]同样,接受肿瘤治疗者的血清CysC浓度也普遍低于同期未接受肿瘤治疗者血清中的CysC浓度。在临床应用中,C有研究表明，主动脉瘤病灶处的组织蛋白酶（B和L）活性和表达均明显升高而Cys C表达却明显降低，且人腹主动脉瘤病灶处组织蛋白酶H表达比正常人群高30倍[4]。LIU[5]等研究发现在人腹主动脉瘤病灶处的平滑肌细胞、内皮细胞和巨噬细胞组织蛋白酶L表达明显升高，而主动脉瘤组织Cys C表达较正常动脉组织明显降低，且患有主动脉瘤患者血清Cys C水平也明显低于正常人群，说明Cys C缺乏与主脉瘤进展密切相关。可见，血清CysC浓度检测对其它疾病也有辅助诊断意义。

因为没有匹配的监测技术。长期以来cysc一直未能广泛应用。直到1994年才有了举世瞩目的发现——Kyhse Andersen J报道了颗粒增强透射免疫比浊法(particle enhanced turbidmetric immunoassay)，而后1997年Finney H 等报道的颗粒增强散射免疫比浊法(particle enhanced nephelometic immunoassay)，这是胱抑素C第一次在生物工程的发展史上立下了里程碑。自此开始,胱抑素C的测定便不再是异想天开,胱抑素C在临床实验上得到了广泛的应用。

目前大部分的 Cys C的诊断都依靠免疫学的方法,通过检测抗体和血清中的抗原反应来说明血清中Cys C的含量。而免疫检测的首要条件就是 Cys C抗体蛋白的制备和纯化。之前的 Cys C是由患者尿液中纯化的,但是产率较低。同期也有其他报道用大肠杆菌表达Cys C,再用Cys C蛋白免疫小鼠,将免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行融合,经过一系列复杂的克隆化和筛选处理[6],从而建立了稳定分泌抗Cys C的杂交瘤细胞株,并诱导通过动物体内诱生腹水大量制备单克隆抗体。

本次的实验是运用设计化学合成一系列的oligo并通过PCR的方法拼接构成CysC的纳米抗体序列, 构建质粒pET32a-14GS0584-6并转入大肠杆菌进行表达。

1。2重链单域抗体及其应用

普通抗体一般是由B淋巴细胞在接受特异抗原刺激后产生，通常由两条重链和两条轻链四条多肽链组成——由于重链分子量较大，轻链分子量较小，两两一组可以构成抗体的Y字形结构，重链和轻链的可变域构成了抗原和抗体结合位点[7]。