1。2。2 预处理

将洗净的根尖浸入装有适量0。05%秋水仙素溶液的指形瓶中,室温下处理3~4小时。也可把根尖浸入小烧杯内的蒸馏水中,杯内放入少许冰块,置于0~4℃的冰箱内低温处理24 h左右。

1。2。3 固定

吸去预处理液,用去离子水清洗2次,每次10min。取出根尖,投入装有卡诺氏固定液(每次使用前现配)的指形瓶中,固定2~24h,取出水洗2次,每次10min。放入95%乙醇溶液中浸泡10min,再换入70%乙醇溶液,保存于4℃冰箱中备用。

1。2。4 水解(酸解) 

取出根尖材料,去离子水清洗2次,每次10min。将根尖材料纵向对剖,然后投入到有1mol/L盐酸的烧杯中,室温下酸解3min,再将烧杯移入58~60℃的水浴锅中,继续酸解8min。

1。2。5 酶解与洗涤来*自~优|尔^论:文+网www.youerw.com +QQ752018766*

倒去多余的热HCl溶液,去离子水漂洗2次,每次10min。吸出根尖材料,浸入1~2滴混合酶液(纤维素酶﹕果胶酶=1﹕1)中,室温下酶解40min左右,或在28℃恒温箱中酶解20 min左右。

吸去酶液,加去离子水,用吸管换洗几次,除去残留酶液后加入45%醋酸。

1。2。6 染色

吸水纸吸干多余水分,把吸干水后的根放在载玻片上,将多余的根切除,只保留2mm根尖部分,用胶头滴管滴半滴石碳酸—品红溶色液。染液和根尖完全接触后,将载玻片在酒精灯上稍微加热,使染液聚拢成水滴状将根尖包住。待染液半干后,镊子夹住盖玻片一角,使盖玻片一侧先与载玻片接触,然后慢慢放下整个盖片,抽出镊子。

1。2。7 压片

在材料周围保留半滴45%醋酸,用吸水纸盖住整张盖玻片。同时左手固定住盖玻片,右手指从吸水纸的左端向右端轻轻抹过去,压片过程中不能使盖片发生移动。预先找准材料位置后,用橡皮隔着吸水纸用力敲击10下,敲击时要从中心向四周敲,使细胞和染色体均匀散开(压片时控制力度,注意控制盖玻片和载玻片间不发生滑动)。等待染色0。5~1h(也可在冰箱内染色12~24h)。

1。2。8 镜检

把压制好的装片放在显微镜下观察,先观察细胞的分散状况和处于中期分裂相的细胞多少,以确定所制装片是否符合鉴定,以及记录下相对应的取材时间。再检查中期分裂细胞中的染色体是否完全散开。假如染色体分散的情况不好,难以观察或计数,可取下装片重新放到桌面上,重新使用笔头重复敲片操作,或直接用手指在盖玻片上轻轻用力挤压。如果操作仔细,用力适度,便可很容易得到分散状况良好的染色体标本,便可进行下一步的观察、计数和照相。

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