2  材料与方法

2。1实验器材

1。高原土壤样品：选取甘肃地区土壤（100g）

2。培养基：R2A琼脂培养基（革兰氏阳性细菌），King氏培养基（革兰氏阴性细菌），改良型PDA培养基（用作拮抗测试）

3。浓度梯度稀释工具（试管，移液枪等）

4。平板划线工具（包括酒精灯，超净台，接种环等）

5。灭菌水

    6。恒温干燥箱，摇床，培养箱，培养皿，三角瓶等

2。2 试验方法

    1。称取一定量的高原土壤土样（如100g），并将其置于烘箱中110℃过夜烘干，次日将其取出再次称重（质量记为m），确定其土壤水分含量（M水=100g-m）。并以此为依据将其补足试验初始设置的样品质量（即干土壤土样设为100g）。

2。将补足的土壤土样加入一定量的灭菌水（45ml，按1:10比例加入）放入摇床，震荡分层（充分震荡），形成菌悬液。

3。取1ml上层悬液进行系列浓度梯度稀释（按1/10ml进行稀释）。

4。进行平板划线（超净台），将培养基置于恒温37℃下适当培养时间后待长出菌落（所用器材及培养基等应提前全部灭菌）。（注意：G+用R2A进行培养，G-用king氏进行培养）。

5。待菌落长出后，挑单菌落纯化保培养保存。

6。测试：选取青枯菌以及所筛选菌种，在改良型PDA培养基进行拮抗作用的测试。