1。2。7 质粒抽提 10

第二章植株的培育和处理过程 11

3。1 转基因的本氏烟草植株的播种及移苗 11

3。2 转基因的本氏烟草的接种 11

3。3观察转基因的本氏烟草的现象 11

3。4 采样 11

3。5 本氏烟草基因组的提取 11

3。6 PCR检测染病株系中的DNA分子 11

3。7 最佳引物的筛选 11

3。8 定量PCR 12

第三章 实验结果分析 13

4。1 转基因植物接种ACMV病毒的结果 13

4。1。1转基因植物接种ACMV病毒的发病图示 13

4。1。2转基因植物接种ACMV病毒的发病情况 0

4。2提取接种ACMV病毒后发病的转基因植物的基因组的结果 2

4。2。1测定提取接种ACMV病毒后发病的转基因植物的基因组的浓度 2

4。2。3 定量PCR的最佳引物的筛选结果 5

4。3 ACMV病毒在转基因植物复制情况的定量PCR结果 0

4。3。1定量PCR图： 0

4。3。2 RDdDM途径的转基因植物接种ACMV病毒抗性实验的分析表 0

4。4 讨论 2

第四章 研究意义 3

参考文献： 4

致谢： 6

引言：

长久以来，双生病毒在许多粮食作物（大豆、玉米）和纤维作物上产生了很严重的危害，因此，给人们造成了巨大的经济损失[1-3]。双生病毒是第二大植物病毒，其中确定种就有133个还有61个暂定种。双生病毒无包膜，病毒壳直接包裹了1-2个2。5~3。0 kb大小的环状的ssDNA，被称为DNA-A和DNA-B[4-5]。双生病毒已从原本的四个属增加到了7个属，分别是玉米线条病毒属（Masrevirus）、甜菜曲顶花叶病毒（Curtovirus）、菜豆金色花叶病毒属（Begomovirus）、番茄伪曲顶病毒属（Topocuvirus）、萝卜曲顶病毒属（Turncurtovirus）、画眉草病毒属（Eragrovirus）和Becurtovirus。它们的基因组都是由两个（双组分）或者一个（单组分）单链的环状的DNA组成的，大多数的菜豆金色花叶病毒属则是由双组分（DNA-A和DNA-B）[6]组成的。双生病毒的侵染会导致植物生长发育迟缓或者不正常，比较典型的感染症状为叶片的畸形蜷曲，还会长有黄色的病斑、叶脉的膨胀及隆起等。

在生物的进化过程里，植物自身也都具备了各种抵御病毒的防御机制，其中比较重要和有效的机制是RNA沉默（RNA silencing），并且RNA silencing这个现象最早发现在植物与病毒相互的作用中[7-8]。沉默机制是由双链的RNA引起的[9-10]。本文主要是从宿主的RdDM途径来抵御双生病毒的机制来展开实验。双生病毒可以随宿主细胞DNA的复制而复制，宿主体内的DNA序列不会发生变化，但是改变的基因功能则是会随着细胞的有丝和减数分裂遗传给下一代[11]。通过DNA甲基化、组蛋白的修饰以及RNA介导的基因沉默等各种机制来调整植物的生长和发育。其中DNA甲基化是比较重要的调节基因功能的重要手段之一。并且DNA甲基化也是研究的最透彻的一种表观修饰形式。特别是在植物中，甲基化可以发生在对序列CG、CHG和非对称序列CHH的任何一种胞嘧啶[12]（H指A、C或T碱基）。研究表明，宿主会在细胞核中利用sRNA来诱导DNA甲基化使病毒的特定序列发生甲基化，从而达到抑制DNA病毒复制的目的[13]。RdDM途径是最早发现在有RNA类病毒同源序列的转基因烟草中[14]，它的发现解决了如何对植物基因组特异位点（定向）甲基化的问题。