摘要黄瓜碱型发根农杆菌K599，其T-DNA区域依次含有orf2、orf3、orf4、orf8、rolA、rolB、rolC、rolD (orf13)、rolE (orf13a)、orf14和cus共11个基因。本研究对前期克隆获得的orf3基因，预测了其编码蛋白质氨基酸序列以及分子量大小；此外，构建了原核表达载体，并实现了orf3基因在原核细胞中的诱导表达。结果表明，orf3基因编码492个氨基酸，诱导表达的蛋白质分子量大小约为53KDa。76654

Abstract The T-DNA region of the cucumopine type A。 rhizogenes K599 contains a total of 11 gene, which are orf2, orf3, orf4, orf8, rolA, rolB, rolC, rolD (orf13), rolE (orf13a), orf14 and cus。 In this study, the orf3 gene obtained from the previous study was predicted to encode protein amino acid sequence and molecular weight。 In addition, the prokaryotic expression vector was constructed and the orf3 gene was induced to express in prokaryotic cells。 The results showed that the orf3 gene encoded 492 amino acids and the molecular weight of the expressed protein was about 53 KDa。 

毕业论文关键词：发根农杆菌K599；T-DNA；orf3基因；原核表达

Keywords: Agrobacterium rhizogenes K599 ; T-DNA ; orf3 gene ; prokaryotic expression

目 录

一． 简介

1。1 发根农杆菌的定义

1。2 发根农杆菌的分类及特征

1。3 毛状根的培养

1。4 代表菌种

二． 材料与方法

2。1 orf3基因编码蛋白质序列以及编码蛋白质分子量大小的预测

2。2 原核表达载体的构建

2。2。1 实验器材和材料

2。2。2 实验操作

2。3 orf3基因在BL21中的诱导表达和检测

三．结果与讨论

3。1 orf3基因编码蛋白质的序列和分子量大小预测结果

3。2 原核表达载体构建

3。3 orf3基因原核表达的结果

四。 参考文献

一． 简介

1。1 发根农杆菌的定义

发根农杆菌（Agrobacterium rhizogenes）属于根瘤菌科（Rhizobiaceae）农杆菌属（Agrobacterium），是一种革兰氏阴性土壤杆菌，且为好氧型菌，一般常在室温下生长，28℃为最佳的生长温度。是可以侵染几乎所有的双子叶植物和少数单子叶植物，从而诱发发根瘤。主要原因是因为它所携带的Ri质粒(Rootinducingplasmid)所引起的。Ri质粒上含有负责发根瘤自主性生长和冠瘿碱合成的基因。在结构上，与Ti质粒较为相似，它主要具有Vir区、T-DNA区及其内的冠瘿碱合成功能区等[1]。论文网

1。2 发根农杆菌的分类及特征

根据发根农杆菌侵染植物体后在植物体内合成的冠瘿碱（opine）的种类，可以将发根农杆菌分为农杆碱型（agropine type）（代表性菌株A4、1855、15834、HRI和TR105）、甘露碱型（mannopine type）（代表性菌株8196、TR107和NCPPB）、黄瓜碱型（cucumopine type）（代表性菌株NCPPB2659和NCPPB2657）和异黄瓜碱型（mikimopine type）（代表菌株 MAFF03-01724、MAFF03-01725、MAFF03-01726和A13）这四种类型。农杆碱型发根农杆菌Ri质粒含有两个T-DNA区，分别为：TL-DNA（left T-DNA border）区（长度为15-20 kb）和TR-DNA（right T-DNA border）区，两个区域之间为一个非插入的DNA区。甘露碱型、黄瓜碱型和异黄瓜碱型Ri质粒的T-DNA则是连续的，除左边界（left border，简称LB）、右边界（right border，简称RB）的序列外，只含有一个连续的T-DNA区，T-DNA上含有rol系列基因和冠瘿碱合成基因等，但无生长素合成基因[7-9]。