黄豆萌发过程中营养物质的动态变化研究(4)
1.5.2 铁含量标准曲线的绘制
量取20 μg/mL的亚铁标准溶液0 mL、2 .5 mL、5 mL、10 mL、20 mL（相当于分别含0、50、100、200、400μg/ Fe2+）分别加入l00 mL烧杯中，用水稀释定容至50 mL，加入150 g/L柠檬酸三钠溶液5 mL，用3 mol/L盐酸或2.5%氨水溶液调节溶液pH为2.4~2.6，加入50 g/L盐酸羟胺溶液5 mL混匀，加入 1,10-邻菲罗琳溶液5 mL，加入醋酸-醋酸钠缓冲溶液l0 mL，将溶液移入到l00 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀放置60 min。
用分光光度计在波长506 nm处用l cm比色皿，以水为参比溶液测定该标准系列的吸光度，以Fe2+标准溶液浓度（μg/mL）为横坐标，本文来自优尔\文+论~文?网，毕业论文 www.youerw.com以其对应吸光度作纵坐标绘制工作曲线。
图3 铁含量的标准曲线
1.5.3 样品液中铁含量的测定
样品液的制备：称取1 g大豆粉加99mL蒸馏水稀释。
吸取1 mL样品液，用水稀释至100 mL，混匀，移取1 mL到100 mL的烧杯中，用水稀释至50 mL，以下操作同工作曲线的绘制，测定其吸光度。不加试样，在同样条件下进行空白实验。
总铁含量按下式计算：
W(Fe)= (m1-m0) *10-6/m
式中：m1为从工作曲线上查得被测试液Fe的质量（μg）；m0为从工作曲线上查得试剂空白溶液中Fe的质量（μg）；m为吸取试样溶液相当于试样的质量（g）。
1.6 样品液中文生素C含量测定
1.6.1 试剂的配制
碘-碘化钾溶液：准确的称取1.269 g碘和4 g碘化钾，用蒸馏水溶解定容至100 mL，滴定的时候再稀释50倍。
1.6.2 文生素C标准曲线的制作
原理：文生素C的分子式是C6H8O6。文生素C有很强的还原性，可被I2定量氧化，因而可以用I2的标准液进行测定。测定时用淀粉作为指示剂，当文生素C被I2氧化完时，再滴加I2，溶液就会变蓝，此时即为滴定的终点，从而检测出样品液中文生素C的含量。
将文生素C标准品加2％草酸配制0.01 mg/mL、0.02 mg/mL、0.04 mg/mL、0.08 mg/mL、0.12 mg/mL、0.16 mg/mL、0.2 mg/mL标准文生素C溶液。各取10 mL加入锥形瓶中，加入1 mL2％淀粉溶液作为指示剂。用碘-碘化钾溶液进行滴定，一边控制好滴定管的阀门，一边用手晃动锥形瓶。直到锥形瓶内溶液变成蓝色，30 S内不退色，即为滴定终点。记下消耗的碘-碘化钾溶液的体积。做三个平行，取平均值。以文生素C的浓度为x值，所消耗的碘-碘化钾溶液的体积为y值，算出滴定值与文生素C浓度相对应的线性方程式。
经线性回归分析计算得y=686.37x + 0.0733（x为Vc浓度），相关系数R2=0.9986。说明在0～0.2 mg/mL浓度范围内，碘-碘化钾溶液滴定值与Vc浓度呈
较好的线性关系。
图4 文生素C标准曲线
1.6.3 样品中文生素C的提取
称量样品各2 g，分别置于50 mL锥形瓶中，各加2％草酸20 mL，研磨至匀浆，研磨后加入草酸溶液进行真空抽滤，滤液以2％草酸溶液定容到100 mL。
1.6.4 样品液中文生素C含量的测定
吸取10 mL待测样品液，加入1 mL2％淀粉溶液作为指示剂，用碘-碘化钾溶液滴定待测样品液至淡蓝色，30 S内不退色即为终点，记下消耗的碘-碘化钾溶液的体积，重复三次。按下式计算样品中文生素C的含量W：
W= CV/m0
式中W：样品中文生素C的含量（mg/g）；C：利用方程式计算所测样品液相应的文生素C浓度（mg/mL）；V：样品液的总体积（mL）；m0：称取的样品质量（g）。
1.7 样品液中总黄酮含量测定
原理：黄酮母核中含有碱性氧原子，一般又多带酚羟基，能和铝离子产生黄色络合物，又加入亚硝酸钠和氢氧化钠，使在碱性溶液中呈红色，溶液在510 nm处有最大吸收，显色反应在60 min内稳定。用芦丁作为对照品，用硝酸铝作为黄酮类比色测定的显色剂，吸光度与芦丁的浓度呈线形关系，采用分光光度法对总黄酮进行了含量测定。
上一篇：怀菊花活性成分及抑菌作用研究