目前国内外关于多糖提取的报道，多集中于溶剂提取法、酸提法、碱提法、酶提法、超滤法、超声波强化法、微波法等[4]。研究发现，不同提取方法具有各自的优缺点，且对多糖的生物活性影响不同。传统热水浸提法以操作简单、易于推广，更有利于维持多糖的功能活性等特点易于被人们接受；酶提法具有工艺简单、多糖得率高、生物活性较强等优点。本实验主要采用了酸提法、碱提法和水提法，辅以酶和超声，初步对多糖的提取及化学成分进行研究与分析。

2。 材料与方法

2。1材料与试剂论文网

    产自金湖的莲藕渣；耐高温淀粉酶、浓硫酸；葡萄糖、葡萄糖醛酸、氢氧化钠、乙醇、三氯甲烷、正丁醇均购为分析纯，微量BCA蛋白定量试剂盒购于北京康为世纪生物科技有限公司。

5% 苯酚溶液的配制：精密称取重蒸馏苯酚12。5g，加适量水溶解后，转移至250mL容量瓶中定容至刻度，摇匀后置于棕色试剂瓶。

间羟基联苯溶液：精确称取0。15g 3-苯基苯酚溶于0。5%的NaOH溶液中，与4°C冰箱中贮存（棕色瓶装有效期一个月）

四硼酸钠-浓硫酸溶液：准确称取1。501g四硼酸钠于100mL烧杯中，加入浓硫酸在磁力搅拌器上搅拌至完全溶解，定容至100mL，室温下保存。

2。2仪器与设备

    超纯水系统：MILLIPORE；电子天平BS210；冻干机：ALPHA 1-2LDPLUS；循环水式多用真空泵 SHB：郑州长城科工有限公司；旋转蒸发器：RE-3000；HH-8数显恒温水浴锅：江苏省金坛亿通电子有限公司；台式高速冷冻离心机：Eppendorf公司；Tecan infinite M200PRO酶标仪，瑞士Tecan公司

2。3方法

2。3。1粗多糖提取

2。3。1。1酸法提取莲藕渣多糖

 准确称取10g莲藕渣，料液比为1:20 (m/V)加入pH3。0的盐酸溶液，加入耐高温淀粉酶100μL，80°C、1h预处理，超声辅助30min，90°C提取3h，离心取上清。再次以料液比为1:20 (m/V)加入pH3。0的盐酸溶液，90°C、3h二次提取，合并上清液，过滤收集上清，浓缩至一定体积。加入4倍体积95%乙醇沉淀过夜，离心收集多糖沉淀。Sevag法去蛋白后，透析48h，冷冻干燥得粗多糖。

2。3。1。2碱法提取莲藕渣多糖

 准确称取10g莲藕渣，料液比为1:20 (m/V)加入pH10。0的NaOH溶液，加入耐高温淀粉酶100μL，80°C、1h预处理，超声辅助30min，90°C提取3h，离心取上清。再次以料液比为1:20 (m/V)加入pH10。0的NaOH溶液，90°C、3h二次提取，合并上清液，过滤收集上清，浓缩至一定体积，加入4倍体积95%乙醇沉淀过夜，离心收集多糖沉淀。Sevag法去蛋白后，透析48h，冷冻干燥得粗多糖。

2。3。1。3水法提取莲藕渣多糖[8]

 准确称取10g莲藕渣，料液比为1:20 (m/V)加入超纯水，加入耐高温淀粉酶100μL，80°C、1h预处理，超声辅助30min，90°C提取3h，离心取上清。再次以料液比为1:20 (m/V)加入超纯水，90°C、3h二次提取，合并上清液，过滤收集上清，浓缩至一定体积，加入4倍体积95%乙醇沉淀过夜，离心收集多糖沉淀。Sevag法去蛋白后，透析48h，冷冻干燥得粗多糖。

2。3。2 粗多糖的得率文献综述

    粗多糖得率（%）=粗多糖质量/原料质量*100%

2。3。3 多糖含量的测定

2。3。3。1 标准曲线绘制

    准确称取105°C干燥至恒重的葡萄糖50mg，蒸馏水定容至50mL容量瓶得标准液。将标准液稀释成质量浓度为50、100、200、300、400、500、600μg/mL的工作液，吸取工作液0。2 mL，加入0。4 mL5%苯酚，混合后迅速加2 ml浓硫酸，室温放置30min，测定490nm处吸光度，以蒸馏水做空白对照。以葡萄糖质量浓度(x,μg/mL)为横坐标，吸光度（y）为纵坐标，制作吸光值-葡萄糖质量浓度标准曲线,其线性回归方程及R2值：y=0。0029x+0。0018（R2=0。9994）。结果表明：葡萄糖在0-600μg/mL范围内其浓度和吸光值线性关系良好