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1．2．3 单因素试验
以复配比例为3:1的复合酶为水解酶，按照1.2.1制备草鱼下脚料蛋白质水解液，选取酶解温度、pH、液料比、酶添加量为因素进行单因素实验，分别为：
（1）酶解温度的单因素实验：取pH7.5、液料比4:1、酶添加量0.2g，酶解时间4h，酶解温度分别为为35、40、45、50、55、60℃。
（2）pH的单因素实验：取酶解温度50℃、液料比4:1、酶添加量0.2g，酶解时间4h，pH分别为6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5。
（3）液料比的单因素实验：取酶解温度50℃、pH7.5、酶添加量0.2g，酶解时间4h，液料比分别为1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1。
（4）酶添加量的单因素实验：取酶解温度50℃、pH7.5、液料比4:1，酶解时间4h，酶添加量分别为0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0%。
在上述试验中，相同的反应条件下分别用与复合酶等量的两种酶的单一酶作为对照组。
1．2．4 响应曲面试验设计
响应曲面实验设计是通过软件Design-expert 8.0.6(State-Ease，Minneapolis，MN，USA)中的Box-Behnken程序完成的，其中酶解温度、pH、液料比、酶添加量作为自变量（以 A、B、C、D表示），蛋白水解液中的氨基态氮含量（mg/g）作为响应值，综合单因素试验结果，确定各单因素取值范围，具体见表1-2。响应曲面实验的结果利用最小二乘法进行二次多项式回归统计分析，其基本模型如下：
式中：β0，βi，βii和βij是回归系数；Xi和Xj代表不同的自变量；Y代表响应变量。
表1-2 响应曲面实验设计因素水平
因素变量 编码及水平
-1 0 1
A温度（℃） 45 50 55
B pH 7.0 7.5 8.0
C液料比 3:1 4:1 5:1
D酶添加量（%） 1.5 2.0 2.5
1．2．5 游离氨基酸测定及分析
（1）氨基态氮含量的测定
氨基态氮含量的测定采用电位滴定法，具体为中性甲醛滴定法测定氨基氮含量。
（2）游离氨基酸组成的测定