菜单
　　

    目前，转座子随机诱变技术是发掘已知基因新功能、发现新基因等研究的有效途径之一。转座子随机诱变技术是将转座子引入细菌染色体中，在细菌基因组中随机插入某些基因，使靶点处的基因失活，得到大量基因突变株，从而构建出突变体文库，从其中筛选表型发生变化的突变株，进一步研究与该表型相关的被失活基因的功能[8]。
    本研究利用转座子随机诱变技术构建猪链球菌2型ZY05719菌株转座子突变体文库，通过人脑微血管内皮细胞（hBMEC）侵袭试验筛选出侵袭能力减弱的突变株，进行反向PCR并测序，对比分析后鉴定出各SS2突变株的沉默基因，为进一步研究SS2侵袭能力相关基因及其功能提供参考。
    1  材料与方法
    1．1  材料
    1．1．1  菌株、质粒和细胞  
        猪链球菌2型野生型菌株ZY05719，于2005年四川猪链球菌2型疫情中由本实验室分离鉴定并保存。大肠杆菌购自天根生化科技（北京）有限公司。质粒pMar4s由本实验室构建并保存。人脑微血管内皮细胞（hBMEC）购自南京科佰（Sciencell）生物技术有限公司。
    1．1．2  引物、试剂和仪器   
    试验所用引物（表1）由南京金斯瑞生物科技有限公司合成。
    表1 实验所用引物
    Table.1 Oligonucleotide primers used in this study
    引物     序列[5] (5'–3')a    功能
    oITR    cccctgcagTAACAGGTTGGCTGATAAGTCCCCGGTCT    TnYLB-1 design（PstI）
    oIPCR1    GCTTGTAAATTCTATCATAATTG    IPCR amplification
    oIPCR2    AGGGAATCATTTGAAGGTTGG    IPCR amplification
    注：引物中的酶切位点由下划线标出。Restriction sites in primers are underlined.
    THB购自美国BD公司；卡那霉素（Kanamycin，Kan）、壮观霉素（Spectinomycin，Spc）、庆大霉素、青霉素购自Sigma公司；Taq I酶，T4 DNA连接酶，2× PrimeSTAR HS (Premix)，DL2000 maker、DL5000 maker、DL15000 maker，TaKaRa MiniBEST DNA Fragment Purification Kit试剂盒购自大连Takara生物工程有限公司；2 × Taq Master mix购自南京诺唯赞生物科技有限公司；Tiangen细菌基因组DNA提取试剂盒购自天根生化科技（北京）有限公司；Omega Plasmid DNA Mini Kit试剂盒，Omega Gel Extraction Kit试剂盒购自Omega公司；核酸染料GoldViewTM购自北京赛百盛基因技术有限公司；FBS购自Gibco公司；DMEM购自HyClone公司；其它试剂均为国产或进口分析纯。
    仪器设备：
        GRP-9270型 隔水式恒温培养箱，上海森信仪器有限公司；
    THZ-25 大容量恒温振荡器，太仓市华美生化仪器厂；
    Thermo SCIENTIFIC LEGEND MICRO 17 微型离心机，赛默飞世尔科技公司；
    Thermo SCIENTIFIC Fisher 高速冷冻离心机，赛默飞世尔科技公司；
        BECKMAN COULTER Avanti J – 30I 离心机，贝克曼库尔特商贸（中国）有限公司；
    Eppendorf  5415R 低温微型离心机，德国艾本德公司；
    Eppendorf  5415 常温微型离心机，德国艾本德公司；
    Eppendorf basic 紫外可见光分光光度计，德国艾本德公司；
    BIO – RAD GenePulser XcellTM电穿孔系统，伯乐中国公司；
    Thermo SCIENTIFIC SHKE6000-8CE 低温摇床，赛默飞世尔科技公司；
    Eppendorf  PCR仪，德国艾本德公司；
        JS-Power 600电泳仪，上海培清科技有限公司；
    BIO – RAD Gel DocTM  XR+ Molecular Imager凝胶成像系统，伯乐中国公司；
    Thermo NanoDrop 2000微量分光光度计，赛默飞世尔科技公司；
    XMTD-204恒温水浴锅，NUOHAI公司；
        Thermo BB150二氧化碳培养箱，赛默飞世尔科技公司；
  1. 上一篇：体外消化地龙蛋白对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响
  2. 下一篇：种鸭高致病性禽流感H5亚型抗体水平的监测

  1. 肝靶向PDK抑制剂的3D-QSAR模型研究

  2. 酶刺激响应型纳米容器的制备

  3. 新型Schiff碱2-噻吩醛缩二氨...

  4. 苯甲酰胺类EZH2抑制剂的3D-QSAR模型研究

  5. U型双萘酰亚胺阴离子受体的设计及合成

  6. 瑞舒伐他汀钙新晶型的制备及其性质研究

  7. 含苯并二噻咯的D-A型共轭聚合物合成及表征

  8. g-C3N4光催化剂的制备和光催化性能研究

  9. 巴金《激流三部曲》高觉新的悲剧命运

  10. C++最短路径算法研究和程序设计

  11. NFC协议物理层的软件实现+文献综述

  12. 江苏省某高中学生体质现状的调查研究

  13. 高警觉工作人群的元情绪...

  14. 中国传统元素在游戏角色...

  15. 现代简约美式风格在室内家装中的运用

  16. 浅析中国古代宗法制度

  17. 上市公司股权结构对经营绩效的影响研究

　　

About

优尔论文网手机版...

主页：http://www.youerw.com

关闭返回