图3-2 甘精胰岛素样品2等电聚焦电泳图谱 6

图3-3 甘精胰岛素样品3与甘精胰岛素标准品等电聚焦电泳图谱 6

图3-4 pI与迁移距离线性关系图 7

1 绪论

近年来，随着我国国民经济条件的改善，人民生活水平的提高，饮食条件的优化，劳动强度的降低，不健康的生活方式的转变，糖尿病的患病率不断升高，已经成为继肿瘤和心脑血管疾病后威胁人类健康的第三大杀手。研究治疗糖尿病的药物刻不容缓，而甘精胰岛素就是治疗糖尿病疗效很好的一种长效胰岛素类似物。

甘精胰岛素是一种通过基因重组技术生产的长效胰岛素类似物[1,2]。它的化学名称是21A-Gly-30Ba-L-Arg-30Bb-L-Arg-人胰岛素,分子式是 C267H404N72O78S6，相对分子质量为6063，理论pI为6。7 [3]。 其与人胰岛素的不同之处在于A链21位的天门冬氨酸（Asn）被甘氨酸（Gly）所取代, 使六聚体结构更加稳定, 并且在B链C末端增加了2个精氨酸（Arg）[4]。胰岛素，包括甘精胰岛素的作用是通过促进骨骼肌和脂肪等周围末梢组织摄取葡萄糖、抑制肝葡萄糖的产生来降低血糖的。但与传统胰岛素相比，甘精胰岛素具有很多优势，比如每天只需注射1次，皮下注射后吸收缓慢，药效平稳且持久，无明显峰值；能模拟人体生理性基础胰岛素的分泌模式；注射时间及部位对药物的疗效无影响；个体间与个体内的差异小；可明显减少低血糖的发生率，提高患者对治疗的顺应性等等[5]。在甘精胰岛素的药学研究中，等电点是其质量控制的重要指标，它可以反映出该类药物的纯度和空间构象的一致性以及生产过程的可靠性，等电点的准确测定在该类药物的研究中发挥重要作用。因此建立一种能够稳定测定甘精胰岛素等电点的方法是很有必要的。

等电点（pI），溶液在某一pH时的解离程度，反映蛋白质在溶液中得失质子的能力。当溶液的pH值达到某一数值时，蛋白质所带的正电荷与负电荷数恰好相等，蛋白质呈电中性，即净电荷为零，此时溶液的pH值称为等电点（pI）。因此可以利用两性电解质在电场作用下于凝胶内形成一个pH梯度，电泳时每种蛋白质就迁移到等于其等电点（pI）的pH处，形成一个很窄的区带，即净电荷为零的区域就是该蛋白质的等电点。因此，可根据pH梯度和迁移距离测定出蛋白质的等电点，等电聚焦电泳就是采用了这种方法。文献综述

等电聚焦（Isoelectric focusing，IEF）又称电聚焦（elcctrofocusing）、聚焦电泳（focusing electrophoresis）等，是1966 年由Harry Rilbe 和Olov Vesterberg 这2位瑞典科学家建立的一种高分辨率的蛋白质分离分析技术[6]。该技术的基本原理是利用蛋白质分子或其他两性分子等电点的不同，在一个稳定且连续的线性pH梯度中进行分离及分析的电泳检测方法[7]。随着科技的发展，等电聚焦电泳从柱电泳到垂直板，又至如今最先进的超薄型水平板电泳，该方法具有省时减料、分辨率高、易于分析和保存等优点[8]。本实验正是采用了超薄型水平板，利用等电聚焦电泳技术，准确地测定出了甘精胰岛素的等电点，为药物生产提供等电点指标，并为胰岛素以及胰岛素类似物等电点的测定提供参考。

2 材料与方法 

2。1 供试材料

甘精胰岛素供试品为高度纯化后的样品，由江苏万邦生化医药股份有限公司提供；甘精胰岛素标准品由中国药品生物制品检定所提供。