2。2。3  有机溶剂体系的筛选

  在本课题的研究中通过实验考察了DMSO、乙酸乙酯、四氢呋喃、甲醇、正庚烷、正己烷、异丙醇、丙酮、乙醇（有机溶剂[10]/反应液体积=1/20即浓度5%，v/v）对催化还原CPMK反应的影响。菌体的前处理同2。2。2，取10个50 mL圆底反应瓶，编号有机溶剂的名称，分别加入1 g湿细胞，0。5 g葡萄糖，0。075 gCPMK，然后再分别加入对应的有机溶剂0。5 mL，悬浮于以上反应体系并用缓冲液定容至10 mL，做一个纯水相体系对照，在30 ℃、200 r/min反应48 h后用10 mL乙酸乙酯对转化反应液进行萃取，取上层萃取液放烘箱70 ℃烘干除去乙酸乙酯，再用1 mL异丙醇溶解剩余物，进行HPLC检测，计算反应e。e。值和转化率。筛选出提高了反应效率的若干种有机溶剂，再对它的最适浓度进行探究，设置浓度梯度5%、10%、15%、20%，配制成相应的浓度体系，再进行生物转化反应。用乙酸乙酯萃取、异丙醇做好前处理，然后进行HPLC检测，计算反应 e。e。值和转化率，优化出添加有机溶剂最适浓度。

2。2。4  离子液体的添加对CPMK不对称还原反应的影响

由于菌体对非天然底物和产物的耐受能力较差，因此需要通过筛选不同的添加剂来建立能够有效减弱底物和产物抑制作用的反应体系，以达到提高催化反应效率。实验课题研究选用1-乙基-3-甲基咪唑醋酸盐、氯化1-烯丙基-3-甲基咪唑、1-乙基-3-甲基咪唑磷酸二甲酯盐、1-乙基-3-甲基咪唑硫酸甲酯盐、1-丁基-3-甲基咪唑磷酸酯盐、1-乙基-3-甲基咪唑亚磷酸酯盐、1,3-二甲基咪唑磷酸亚甲酯、三羟乙基甲基铵硫酸甲酯盐8种离子液体。先进行菌体前处理，然后取9个50 mL圆底反应瓶，编号离子液体的名称，分别加入1 g湿细胞，0。5 g葡萄糖，0。075 gCPMK，然后再分别加入对应的离子液体溶液0。5 mL，悬浮于以上反应体系并用缓冲液定容至10 mL，做一个纯水相体系对照，在30 ℃、200 r/min反应48 h后用乙酸乙酯和异丙醇进行前处理，再进行HPLC检测，计算反应e。e。值和转化率。

2。3  反应产物e。e。值和转化率的计算 文献综述

底物CPMK，产物(S)-CPMA采用高效液相色谱分析，流动相为正己烷/异丙醇=（9/1,v/v），溶液流速为1。0 mL/min，柱温设置为25 ℃，进样量10 μL，紫外检测波长设置240 nm。

产物(S)-CPMA 的对映体过量比值（e。e。）和转化率（yidld）可由以下算式计算得到：

式中：[S]表示(S)-CPMA产物的峰面积，[R]表示(R)-CPMA产物的峰面积，[D]表示剩余底物的峰面积。ee值它表示手性化合物所转化成的两种对映体S型与R型的比值，通常用百分数表示。用来表示该化合物的光学纯度。

3  结果与讨论

3。1  菌种筛选

对来自于江苏省各个地方的土壤样品，共筛选到40多种菌体，进行薄层层析（TLC）检测（如图1），选取出催化活性效果较好的5种菌体，再采用高效液相色谱法测定所筛菌株生物催化反应的e。e。值和产率。最终筛选出具有稳定的羰基还原酶活性和立体选择性的Q1菌株作为手性醇还原反应的酶活性来源，该菌体转化的还原反应反应效率高，在筛选反应条件下其反应 e。e。值和转化率分别为 67。8%和24。8%[11]。该菌株通过肉眼观察和进一步的显微镜放大观察初步断定为霉菌