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摘 要：腈水解酶是一种重要的腈转化酶，能催化腈化合物合成相应的羧酸或者酰胺类物质。与传统的有机化学合成高压、高温的苛刻条件相比条件，酶法催化合成具有较高的转化率，并能在温和的反应条件进行。用磁性微体作为载体进行酶的固定化具有环保、酶重复利用效果好和降低生产成本等优点。本文用固定化的重组大肠杆菌催化三氰基吡啶制备尼克酸。研究pH值，固定化时间，酶液浓度,磁珠量对催化过程的影响。38612
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毕业论文关键词：腈水解酶；固定化；烟酸
Studies on immobilized nitrilase catalyze hydrolyze 3- cyanopyridine
Abstract:Nitrilase is such an enzyme that can convert nitriles into carboxylic acid or ammonium. Compared with the harsh condition of chemical synthesis, such as high pressure, high temperature catalysis through enzyme brings about high conversion rate and wide application under mild condition. The application of magnetic microsphere immobilized enzyme has good environmental characteristics, repeated use effect, and it can reduce the production cost. In this paper，Nicotinic acid was prepared by immobilize recombinant E.Coli. The reaction factors influence catalytic hydrolyzing 3- cyanopyridine process were studied including the the pH ,the immobile time ,concentration of enzyme solutions and the amount of Nitrilase.
Key Words：Nitrilase；immobilized；Nicotinic acid
目录
1 研究背景 1
1.1 生物催化研究的意义 1
1.2烟酸的介绍 1
1.3烟酸的制备方法 2
1.3.1氨氧化法 2
1.3.2试剂氧化法 2
1.3.3生物催化法 2
1.4腈水解酶的介绍 3
1.5酶的固定化方法 3
1.5.1包埋法 4
1.5.2多聚组氨酸标签与Co2+/Ni2+之间的亲和作用 4
1.5.3共价结合法 4
1.6影响酶催化腈水解的主要因素 5
1.6.1底物和产物的抑制 5
1.6.2反应介质的影响 5
1.6.3温度和pH的影响 6
1.7研究意义与内容 6
1.7.1研究意义 6
1.7.2研究内容 7
2 实验原理和流程 8
3 试验方法与材料 9
3.1 实验材料 9
3.1.1 菌种 9
3.1.2 培养基 9
3.1.3 自配试剂 9
3.1.4 主要试剂 9
3.1.5 主要仪器 10
3.2 实验方法 11
3.2.1 分析方法 11
3.2.2 菌体培养 11
3.2.3 测定游离细胞的酶活 12
3.2.4 大肠杆菌的破碎 12
3.2.5腈水解酶的固定化 12
3.3海里磁珠固定化腈水解酶条件优化 13
3.3.1磷酸盐缓冲液与BufferA缓冲液固定化腈水解酶的研究 13
3.3.2固定化时间的研究 13
3.3.3. 磁珠量的研究 13
3.3.4 粗酶浓度的研究 13
3.3.5 最适pH研究 14
3.3.6 pH稳定性研究 14
3.3.7固定化酶的操作稳定性研究 14
4 实验结果和讨论 15
4.1磷酸盐缓冲液与BufferA缓冲液固定化腈水解酶的研究 15
4.2固定化时间的优化 17
4.3磁珠量的优化 18
4.4粗酶浓度的优化 19
4.5 固定化酶最适pH值 20