分光光度法、高效的液相色谱法、电化学法和毛细管电泳法等是现在文献中可以找到的与盐酸二甲双胍有关的测定方法 [10-11]。有关液相色谱的报道是最多的,它的分析时间相对于其他方法来说要较长些,花费的钱多,样品的处理较为麻烦,毛细管容易被污染;分光光度法的针对性不强,容易收到共存物的干扰;电化学法在使用的时候,需要的样品也多,重现性也不太好;在弱酸的环境下,盐酸二甲双胍会发生质子化从而带正电。
样品的进样、样品的分离、样品的检测这三步是毛细管电泳分离的基础的步骤:一根被充满混合缓冲液的毛细管就是毛细管电泳的基础装置了,进样:跟毛细管相连接的两个小玻璃瓶可以从毛细管的一边经过“压力”或者是“电迁移”进入毛细管;分离:分离时电泳会与高压的电源一起进入装有混合缓冲液的小玻璃瓶中,这时候样品会朝着与自身所带的电荷的极性相反的电极的方向移动。迁移的速率还会因为各含量中的分子的体积、自身的电荷数、等电点等性质的不同而不一样,速度快的会先到达毛细管输出端周围的光检测器,检测、记录它的吸光度,还要在屏幕上标出横坐标(迁移的时间)和纵坐标(吸光度)作为一个图可以更加直观的观察记录;检测:以被检测物质的组分和背景电解质的吸光度的不同作为检测的原理,被测的样品经过检测窗时,服从朗伯-比尔定律的吸光度发生的变化源^自·优尔|文\论]文'网[www.youerw.com,在一定的实验条件下,被测的组分与被测组分的吸光度是呈正比的。
一般的情况下电流通过导体时会产生热量(焦耳热)。传统平板凝胶的电泳有一个很大的局限性,那就是它无法克服因为两端的高电压产生的焦耳热所带来的负面的作用。焦耳热会使筛分的介质的内部产生粘度、温度和分离速度的不一样,从而影响迁移、 降低效率、使区带变宽。这样的负面的影响会使得电场强度也随之改变,呈正比,导致高电压的引入的限制会使得同时提高电泳的速度。样品被毛细管电泳吸入之后在一个极细的柱子里中分析,柱子越细就越能减小电流,使得焦耳热减小,随之还可以增大散热的面积,还可以增大散热的效率,更大的降低管的中心与管两壁之间的温差,从而降低柱径向的每一种梯度的差,确保结果的高效性。所以电压可以加大到100~200 V/cm,从而更大更全面地提高分离的质量。
在有机化学、无机化学中的离子、中性的分子、手性的化合物、蛋白质和多肽、DNA和核酸等等这些都可以用毛细管电泳来进行分析[16-20]。
本研究采用毛细管电泳仪来测定盐酸二甲双胍,可以实现较为准确的测定盐酸二甲双胍的快速的测定[20-22]。
1 实验部分
1.1 仪器与试剂
毛细管(有效长度10.2 cm,内径75 μm)由美国 Beckman 公司生产;电子天平AL204是由梅特勒-托利多仪器有限公司生产;PHS-3C型精密酸度计由上海大普仪器有限公司生产;水浴锅(XMTB数显调节仪)由浙江余姚工业一表二厂生产;Beckman P/ACE MDQ 型毛细管电泳仪带有二极管阵列检测器由美国 Beckman 公司生产;
盐酸二甲双胍,格华止生产;盐酸由开封市芳县化学试剂有限公司生产;氢氧化钠由天津市风船化学试剂科技有限公司生产;十二烷基硫酸钠,SDS(化学纯)由上海展云化工有限公司生产;无水乙醇(分析纯)由天津市凯通化学试剂有限公司生产;其pH值用0.5 mol/L NaOH和0.6 mol/L HCl调节。
盐酸二甲双胍标准储备溶液:1.00 g/L,称取盐酸二甲双胍对照品0.0100 g,然后用超纯水溶解后定溶于10 mL容量瓶中,4 ℃的环境下保存。需要使用的时候稀释至所需浓度。