耐高温产酯酶芽孢菌的筛选及产酯酶条件与酶学特性研究(2)
2.2 耐高温芽孢菌产酯酶条件研究 7
2.2.1 碳源对芽孢菌产酯酶的影响 7
2.2.2 氮源对芽孢菌产酯酶的影响 8
2.2.3 发酵时间对芽孢菌产酯酶的影响 8
2.2.4 金属离子对芽孢菌产酯酶的影响 9
2.3 耐高温芽孢菌产酯酶酶学特性 10
2.3.1 pH值对芽孢菌酯酶活力的影响 10
2.3.2 温度对芽孢菌酯酶活力的影响 10
2.3.3 耐高温芽孢菌酯化酶作用条件的正交优化 11
3. 结论与讨论 12
参考文献 12
致谢 14
一株耐高温产酯酶芽孢菌的筛选及产酯酶条件与酶学特性研究 引言
酒曲芽孢菌是白酒酿造微生物的重要一类，同时也是白酒酿造微生物的优势菌群，其多种代谢产物对白酒风物质的形成起重要作用[1]，酯酶是白酒酯类香气物质合成的重要酶类，耐高温芽孢菌在酒曲生产过程中可耐受一定的高温而存活，在产酯酶的细菌类群中占有重要的地位，因此耐高温产酯酶芽孢菌在食品发酵和酿造工业中有广泛的应用。
目前对耐高温芽孢菌的筛选主要是产纤文素酶和淀粉酶的芽孢菌的筛选，研究资料表明，芽孢菌能够产生蛋白酶、淀粉酶、纤文素酶、葡聚糖酶、植酸酶、果胶酶和木聚糖酶等十几种酶[1-2]。由于蛋白酶、淀粉酶是工业酶中应用最为广泛的酶，因此，对芽孢菌产酶条件的研究也大多集中在产淀粉酶或蛋白酶条件的研究，很少涉及耐高温产酯酶芽孢菌的筛选及产酯酶条件与酶学特性的研究。
本文就以生命科学与农学学院发酵工程实验室冷冻保藏的芽孢菌为试验材料，从中筛选出耐高温产酯酶芽孢菌，从碳源、氮源、金属离子、发酵时间等方面探讨其产酯化酶的最适条件。并从pH值、作用温度方面研究该株芽孢菌代谢产酯酶粗提液的酶学特性，该研究对于食品发酵和酿造工业微生物的强化应用提供可靠的菌种，同时产酯酶条件与酶学特性研究对发酵工艺控制提供了一定的理论支撑。
1. 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验试材
芽孢菌：生命科学与农学学院发酵工程实验室冷冻保藏的芽孢菌。
1.1.2 主要培养基
产酯酶芽孢菌的筛选培养基[3]：牛肉膏5 g，蛋白胨10 g，氯化钠 5 g，三丁酸甘油酯5 g，琼脂20 g，水1000 mL，pH 7.0；
基础培养基[2]：牛肉膏5 g，蛋白胨10 g，氯化钠 5 g，水1000 mL，pH 7.0；
产酯酶发酵培养基[3]：蛋白胨10 g，蔗糖5 g，三丁酸甘油脂乳化液10 g，磷酸氢二钾2 g，硫酸镁0.5 g，硫酸铵1 g，水1000 mL；
种子液培养基[4]：蛋白胨1 g，酵母膏0.7 g，葡萄糖1 g，硫酸铵0.2 g，硫酸镁0.2 g，磷酸氢二钾1 g，水1000 mL，pH值7.2-7.4；
活化与斜面保藏培养基[4]：蛋白胨1 g，酵母膏0.7 g，葡萄糖1 g，硫酸铵0.2 g，硫酸镁0.2 g，磷酸氢二钾1 g，琼脂20 g，水1000 mL，pH值7.2-7.4；
以上所有培养基灭菌条件：121℃，0.1 MPa，30 min。
1.1.3 试剂
pH 7.0磷酸缓冲液：称取磷酸氢二钠4.370 g，磷酸二氢钠1.217 g，用水溶解并定容至100 mL。
0.05 mol/L NaOH溶液：称取氢氧化钠固体0.2 g，用水溶解并定容至100 mL。
pH 6.0磷酸缓冲液：称取磷酸氢二钠0.881 g，磷酸二氢钠2.737 g，用水溶解并定容至100 mL。
pH 8.0磷酸缓冲液：称取磷酸氢二钠6.770 g，磷酸二氢钠0.165 g，用水溶解并定容至100 mL。
三丁酸甘油酯乳化液：丙酮与三丁酸甘油酯体积比3:1 混合，用力混匀。