枯草芽孢杆菌产中性蛋白酶发酵工艺的研究(3)
枯草芽孢杆菌是一种安全的蛋白酶生产菌，它可产生大量的胞外蛋白酶，在工业成产中应用广泛。主要应用有以下五个方面：
（1）在食品工业中的应用：如奶酪生产，大豆、玉米深加工、水解产物的脱苦及阿斯巴甜的合成等
（2）在制革行业中应用：如脱毛，脱皮等
（3）洗涤剂行业，衣服的主要污染是汗液、血迹、食迹等。在汗液中除脂肪外，干物质的1/3是蛋白质。织物上的蛋白质，特别是陈化后很难洗除，加入蛋白酶可大大的提高洗涤效果，延长织物的寿命
（4）医药行业，可作为消化道炎、化痰止咳等药物以及治疗跌打伤，水肿血肿、消除坏死组织等
（5）除了应用于工业及医药行业外，还可以应用于基础研究中，蛋白酶的选择性肽键裂解可用于阐明结构功能关系、肽链合成以及蛋白质测序等
正是由于枯草芽孢杆菌产酶量高、安全性好、环保又易于取材的特点所以选取枯草芽孢杆菌作为中性蛋白酶的生产菌株进行后续实验。
1.4 课题研究的意义和目的
随着全球环境问题日益严重，发展低碳经济和低碳技术已成为世界各国的研究热点。纺织行业是高耗能、高污染行业，特别是洗毛工业对环境的污染比较严重，且传统洗毛工艺很难去除蛋白质污染物，影响后加工的质量和成品的色光。为解决这一难题，本研究应用枯草芽孢杆菌蛋白酶进行洗毛，可有效去除蛋白质污染物，提高洗净毛的质量。
不同PH值的蛋白酶对饲料作用的影响正成为饲料行业的一个研究热点，已有相关报道，中性蛋白酶作为饲料添加剂有很好的效果，但是中性蛋白酶的产量低、成本高等因素限制了其大规模应用。
因此，为提高中性蛋白酶的发酵活力和应用性能，以适应不同行业对中性蛋白酶的应用需求，本研究以枯草芽孢杆菌产蛋白酶的发酵条件为研究对象，通过单因素试验和正交试验等实验方法和分析方法优化产酶的发酵条件。
在国内外蛋白酶研究领域中，在不同发酵工艺下，不同菌株或同一菌株的蛋白酶活力也有较大的差异，而发酵条件影响着这种差异从而也影响着其应用效果。菌株产蛋白酶的工艺优化是提高蛋白酶活力的主要途径之一。因此研究枯草芽孢杆菌产蛋白酶发酵条件的优化是很有必要的。若取得了很好的效果，为进一步提高该菌产蛋白酶的能力奠定了基础。
论文写作目标：
（1）优化枯草芽孢杆菌产蛋白酶的培养基配方及发酵条件
（2） 通过发酵条件的优化，计算酶活提高率
2.实验材料与方法
2.1 使用的材料试剂及仪器设备
菌种：枯草芽孢杆菌
试剂：Folin酚试剂B、蒸馏水、0.55mol/L碳酸钠溶液、10%三氯乙酸溶液、0.2mol/L磷酸缓冲液（PH7.5）、0.5%酪素溶液、氢氧化钠溶液、DNS试剂
培养基：（1）固体斜面培养基：牛肉膏1g、蛋白胨1g、Nacl0.5g、葡萄糖0.5g、琼脂2g、加水到100mL，调节pH值至7.0-7.2
（2）初始液体发酵培养基: 蛋白胨8g/L、牛肉膏5g/L、 葡萄糖8g/L、 磷酸氢二钠4g/L，加水1000mL，调节pH值至7.0-7.2
设备：7220分光光度计、移液管、洗耳球、酒精灯、精密天平、恒温水浴锅
2.2 实验方法
2.2.1 实验流程
菌种活化 发酵培养基中最佳碳源的确定 发酵培养基中最佳碳源的确定
发酵培养基中最佳碳、氮源的配比 发酵培养基中无机盐对菌种的影响
生长曲线的绘制（跟踪测定酶活、pH值及总糖含量） 不同温度对菌种产
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