超声波辅助提取番茄中SOD酶及初步纯化(2)
1.7.3 SOD在食品工业方面的应用 10
1.8本课题的研究目的和意义 10
2. 材料和方法 11
2.1试验材料 11
2.1.1 试验原辅料 11
2.1.2 主要试剂药品 11
2.1.3 试验所用溶液的配制 11
2.2 主要设备和仪器 12
2.3 试验方法 13
2.3.1 试验流程 13
2.3.2 原料预处理 13
2.3.3超声波破碎法细胞破壁 13
2.3.4 超声波提取 13
2.3.5 热处理 13
2.3.6有机溶剂分级沉淀 14
2.3.7测定蛋白质浓度和酶活 14
2.4 超声波辅助提取最优条件确定 16
2.5 有机溶剂与丙酮沉淀法纯化 19
2.5.1 测定粗酶液的蛋白质浓度和酶活力 19
2.5.2 测定有机溶剂纯化后的蛋白质浓度和酶活力 19
2.5.3 测定丙酮沉淀纯化后的蛋白质浓度和酶活力 20
3.结果与分析 21
3.1 单因素结果与分析 21
3.1.1料液比对SOD酶提取的影响试验 21
3.1.2 缓冲液pH值对SOD酶提取的影响试验 22
3.1.3超声功率对SOD酶提取的影响试验 23
3.1.4 超声作用时间对SOD酶提取的影响试验 24
3.2 正交试验结果与分析 25
3.3 纯化结果与分析 27
3.3.1 粗酶液的结果与分析 27
3.3.2 酶液A的结果与分析 27
3.3.3 酶液B的结果与分析 27
4.谢辞 29
5.参考文献 30
1.引言
1.1 SOD的发现
超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase, SOD)，又被称为肝蛋白、奥谷蛋白，是一种含有金属离子具有活性的蛋白酶。它是由生物合成分泌的活性物质，具有消除氧自由基等生物在新陈代谢过程中产生的有害物质。通过不断地补充外源性SOD可以达到减缓人体衰老的奇特效果。
1938年Mann和Keilin首次从牛红血球中分离出一种蓝色铜蛋白（最初定名为血铜蛋白He mocuprein）［1］。从那时开始算起，人们对超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase, EC1.15.1.1, SOD）的研究己长达七十多年的历史。1969年McCord和Fridovich等重新发现这种蛋白，经过研究之后弄清了它具有催化过氧阴离子发生歧化反应的特殊性质，所以正式将其命名为超氧化物歧化酶［2］。
1.2 SOD类型及其分布
SOD广泛存在于各种生物细胞中，如动物、植物和微生物。后来人们发现，依靠有氧呼吸的生物细胞中几乎都有SOD的存在。按其所含金属辅基不同，可以把SOD超氧化物歧化酶分为以下四种类型。
1.2.1 Cu-Zn SOD
含铜（Cu）锌（Zn）金属辅基的被称为Cu-Zn SOD，呈淡蓝色，相对分子质量约为32kDa，主要存在于真核细胞的细胞质中，是最先发现的一种类型，也是最为常见的一种。
1.2.2 Fe SOD
含铁（Fe）金属辅基的被称为Fe SOD，呈黄褐色，分子质量约为38.7kDa，主要存在于原核细胞以及少数植物细胞的细胞器中，如叶绿体。
1.2.3 Mn SOD
含锰（Mn）金属辅基的被称为Mn SOD，呈紫色，相对分子量约为40kDa，主要存在于原核细胞和真核细胞以及线粒体的基质中，也曾发现于高等植物中的过氧化物酶体中。
1.2.4 Ni SOD
含镍（Ni）金属辅基的，是近几年才被发现的一种新类型，据报道有人从链球菌中分离出Ni SOD，与其有关的研究及其他报道较少［3］。
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